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RT-PCR、western blot檢測所需細胞數(shù)及細胞培養(yǎng)板的選擇 已有1人參與
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本人要做原代細胞的培養(yǎng)，一種干細胞，貌似比較難養(yǎng)，目前只查到其在培養(yǎng)板中培養(yǎng)成功的文獻，而且存活時間也不長，7-10天左右，數(shù)目也不多，就5-10個克隆，每個克隆細胞在20-40左右。 本人的實驗室，做了細胞培養(yǎng)后想檢測細胞內(nèi)的幾種蛋白的表達及其mRNA的情況，需要RT-PCR、western blot，但怕細胞數(shù)量不夠，不知道做這2種檢測的話，至少需要多少細胞數(shù)呢？？ 再者，各種不同的細胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶的區(qū)別是什么，請指教�。。� 我知道的一點就是，不同的細胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶，細胞長滿后所得細胞數(shù)目不一樣。但是他們的使用用途來說有什么不同呢？ 我這個實驗是在不同的體外干預下檢測干細胞的增殖情況，如果數(shù)目夠的話還想測mRNA和蛋白，這樣的話用哪種培養(yǎng)器皿比較好呢？ 非常感謝�。�！ |
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suwen-dian
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2樓2013-04-15 14:50:33
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
lijh1234(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵應助 2013-04-16 20:54:47
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lijh1234(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵應助 2013-04-16 20:54:47
| 培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿以及培養(yǎng)瓶都可以用來培養(yǎng)細胞，本質(zhì)上沒有太大區(qū)別，關鍵是看你的實驗目的，如果是做增殖實驗，肯定是首選培養(yǎng)板，可以酶標儀讀數(shù)。對于提取RNA或者蛋白，肯定是選擇培養(yǎng)皿方便細胞收集。培養(yǎng)瓶比較適合傳代培養(yǎng)。另外除了普通的培養(yǎng)器皿之外還有特殊涂層的，可以改善細胞貼壁生長狀況，或者阻止細胞貼壁，根據(jù)不同的細胞以及實驗要求選擇。一般來說RT-PCR需要的細胞數(shù)目不用很多，100 0000對于提取RNA足夠了，對于蛋白提取，最好是10cm培養(yǎng)皿長滿。 |
3樓2013-04-16 08:05:09
4樓2013-04-17 10:25:55
lanrushui
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