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[求助]
RT-PCR、western blot檢測(cè)所需細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇 已有1人參與
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本人要做原代細(xì)胞的培養(yǎng)，一種干細(xì)胞，貌似比較難養(yǎng)，目前只查到其在培養(yǎng)板中培養(yǎng)成功的文獻(xiàn)，而且存活時(shí)間也不長(zhǎng)，7-10天左右，數(shù)目也不多，就5-10個(gè)克隆，每個(gè)克隆細(xì)胞在20-40左右。 本人的實(shí)驗(yàn)室，做了細(xì)胞培養(yǎng)后想檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的幾種蛋白的表達(dá)及其mRNA的情況，需要RT-PCR、western blot，但怕細(xì)胞數(shù)量不夠，不知道做這2種檢測(cè)的話，至少需要多少細(xì)胞數(shù)呢？？ 再者，各種不同的細(xì)胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶的區(qū)別是什么，請(qǐng)指教�。�！ 我知道的一點(diǎn)就是，不同的細(xì)胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶，細(xì)胞長(zhǎng)滿后所得細(xì)胞數(shù)目不一樣。但是他們的使用用途來(lái)說(shuō)有什么不同呢？ 我這個(gè)實(shí)驗(yàn)是在不同的體外干預(yù)下檢測(cè)干細(xì)胞的增殖情況，如果數(shù)目夠的話還想測(cè)mRNA和蛋白，這樣的話用哪種培養(yǎng)器皿比較好呢？ 非常感謝�。。� |
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ujsyangyong
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lijh1234(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-04-16 20:54:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lijh1234(縮++影代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-04-16 20:54:47
| 培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿以及培養(yǎng)瓶都可以用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，本質(zhì)上沒(méi)有太大區(qū)別，關(guān)鍵是看你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模绻亲鲈鲋硨?shí)驗(yàn)，肯定是首選培養(yǎng)板，可以酶標(biāo)儀讀數(shù)。對(duì)于提取RNA或者蛋白，肯定是選擇培養(yǎng)皿方便細(xì)胞收集。培養(yǎng)瓶比較適合傳代培養(yǎng)。另外除了普通的培養(yǎng)器皿之外還有特殊涂層的，可以改善細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)狀況，或者阻止細(xì)胞貼壁，根據(jù)不同的細(xì)胞以及實(shí)驗(yàn)要求選擇。一般來(lái)說(shuō)RT-PCR需要的細(xì)胞數(shù)目不用很多，100 0000對(duì)于提取RNA足夠了，對(duì)于蛋白提取，最好是10cm培養(yǎng)皿長(zhǎng)滿。 |
3樓2013-04-16 08:05:09
4樓2013-04-17 10:25:55
lanrushui
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5樓2013-04-17 15:26:22
6樓2013-04-25 23:50:05
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