 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2844 | 回復: 1 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
yuguiyan至尊木蟲 (文壇精英)
|
[求助]
流式測細胞周期的步驟和PBS配置方法
|
|||
| 求助流式測細胞周期的步驟和PBS配置方法 |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有174人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
湖北師范大學招調劑啦
已經(jīng)有6人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 流式細胞儀實驗方法和Bio-Rad熒光定量PCR應用指南完整版
已經(jīng)有381人回復
- 流式細胞儀測細胞周期，各個周期峰分不開，只有一個寬峰是什么原因？謝謝指點��！
已經(jīng)有9人回復
- 用流式細胞儀檢測小鼠骨髓細胞周期，求骨髓細胞固定步驟
已經(jīng)有4人回復
- 流式上機前細胞預處理的困惑
已經(jīng)有9人回復
- 如何分析流式細胞儀所做細胞分裂周期的三個圖
已經(jīng)有8人回復
- 【求助】求助關于流式細胞的細胞周期檢測結果分析
已經(jīng)有7人回復
- 【求助/交流】流式細胞儀是干什么用的
已經(jīng)有20人回復
- 【求助】流式細胞儀細胞凋亡研究方面
已經(jīng)有15人回復
- 【求助/交流】PI法 細胞周期 細胞凋亡
已經(jīng)有10人回復
- 【求助/交流】細胞凋亡率的測定能不能不用流式細胞儀測？
已經(jīng)有7人回復
小智野山參
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1169.3
- 散金: 42
- 帖子: 112
- 在線: 43.3小時
- 蟲號: 1167489
- 注冊: 2010-12-11
- 性別: MM
- 專業(yè): 腫瘤化學藥物治療
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 相當熱心，還很詳細哦 2013-04-16 16:44:59
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 相當熱心，還很詳細哦 2013-04-16 16:44:59
|
PBS配制1L： NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4•12H2O 3.58g KH2PO4 0.27g 調pH至7.0-7.2,高壓滅菌 細胞周期檢測 (1) 細胞培養(yǎng)于含10%新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，細胞近80%融合時傳代； (2) 制備細胞懸液：取對數(shù)生長期細胞，胰酶消化后，加入含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，吹打制成單個細胞懸液； (3) 細胞接種：細胞計數(shù)后以細胞數(shù)2×105個/孔接種到六孔板，加入適量的培養(yǎng)基至2mL/孔，靜置待細胞沉到板底后放入培養(yǎng)箱于37℃ 、5% CO2培養(yǎng)； (4) 藥物處理：細胞靜置培養(yǎng)24h，觀察細胞已完全貼壁后，分別給予不同濃度的藥物（DMSO含量為1‰），陽性對照組給予。。。。，陰性對照組給予同體積的DMSO，每個濃度設兩孔； (5) 收集細胞：培養(yǎng)48小時后用不含EDTA的胰酶消化細胞，并與原培養(yǎng)液一起離心收集細胞（4℃、1000g、5min），冰預冷的PBS重懸細胞并離心沉淀細胞； (6) 固定細胞：吸除上清液，可殘留約50μL，避免吸走細胞，邊震蕩邊加入1mL冰預冷的70%乙醇，輕輕吹打混勻細胞，于4℃固定過夜； (7) 收集細胞：離心收集細胞（4℃、1000g、5min），用冰預冷的PBS重懸一次并離心沉淀細胞； (8) 細胞染色：吸除上清液，可殘留約50μL,避免吸走細胞，每個樣品加入0.5mL配好的染色液（含PI，RNA酶，染色緩沖液），緩慢并充分重懸細胞沉淀，于37℃避光溫浴30分鐘； (9) 上機檢測：染色完成后用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm處檢測紅色熒光。 流式細胞儀分析： (1) 按流式細胞儀操作規(guī)程開啟儀器，用FL2的熒光通道來采集PI的信號； (2) 取500μL樣本轉移到專用的流式上樣管，上機前輕輕彈擊試管底部混勻細胞，先用陰性對照組上機調試儀器； (3) 打開獲取實驗數(shù)據(jù)的軟件CellQuest，確定DDM門（doublet discrimination module，黏連體辨別模式）的參數(shù)是FL2； (4) 分別畫一個FSCvs.SSC散點圖、FL2-Wvs.FL2-A散點圖、FL2-A的直方圖； (5) DNA分析時，F(xiàn)SC、SSC和FL2都使用線性模式采集信號，調節(jié)FL2的電壓，使FL2-A的G1期細胞的峰位于200道數(shù)的位置上； (6) 實驗條件調節(jié)好后可以上機檢測，DNA檢測時最好用低速收。 |
2樓2013-04-16 15:42:07
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 yuguiyan 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 調劑 +4 | 好好讀書。 2026-03-28 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 070300一志愿211，312分求調劑院校 +12 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0710生物學求調劑！ +5 | 敘述文 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601 329分調劑 +6 | yzsa12 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
[考研] 322求調劑 +10 | 舊吢 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 272求調劑，接受跨專業(yè)調劑！ +3 | 閑魚盧 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 323分 食品與營養(yǎng)調劑 +3 | 嘿ooo 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調劑 +11 | 多久上課 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績：338，四六級已過，有科研經(jīng)歷，求調劑！ +7 | Zuhui0306 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 085600求調劑 +7 | BBQ233 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調劑，一志愿 南京航空航天大學大學 ，080500材料科學與工程學碩 +6 | @taotao 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學，324分求調劑 +6 | 零八# 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 總分293求調劑 +8 | 加一一九 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 070300求調劑306分 +4 | 26要上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿211院校 344分 東北農業(yè)大學生物學學碩，求調劑 +5 | 丶風雪夜歸人丶 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 266求調劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 315調劑 +4 | 0860求調劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|