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[求助]
糖肽（肽含量很少）用β消除法分離糖鏈和肽段后，怎么測定該反應(yīng)已經(jīng)完全反應(yīng)了？
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| 本人想鑒定糖肽中是否只有O連接，用β消除法分離糖鏈和肽段后，怎么測定該反應(yīng)已經(jīng)完全反應(yīng)了？求指教 |
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5樓2013-04-21 19:18:57
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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lz說的是β-消除-馬氏加成（BEMAD）方法吧。該方法O-連接糖修飾的Thr和Ser會發(fā)生β-消除反應(yīng)，在α碳和側(cè)鏈原子之間形成雙鍵，二硫蘇糖醇（DTT）打開雙鍵并與硫醇形成二硫鍵，進一步通過硫醇親和柱富集糖修飾的蛋白。不知道lz是想檢測什么，如果僅僅是檢測O連糖有無，那反應(yīng)不完全應(yīng)該問題也不大。如果是想鑒定位點，那反應(yīng)完全肯定是最好的。lz可以參考復(fù)旦大學(xué)一個博士論文（作者名字忘了，你可以查一下），這個人BEMAD摸了多種方法，可能會涉及到相關(guān)反應(yīng)完全與否的檢測。 ps,如果想測定o連糖，可以嘗試pngase F酶切除N連接糖（絕大部分），再用凝集素做富集，LC-MS/MS檢測，如果lz還有時間有材料去重復(fù)這個實驗的話。 |
2樓2013-04-17 10:53:09
3樓2013-04-17 21:53:26
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加到附件了。 |
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2013-04-19 13:23:10, 15.03 M
4樓2013-04-19 13:23:45
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