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liuquan0814金蟲 (小有名氣)
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[求助]
細胞生長在凝膠后，梯度酒精脫水時凝膠的固定問題
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細胞（成纖維細胞）在水凝膠（高約為1mm）上面生長兩天后，采用戊二醛固定，隔夜處理后，PBS清洗三次。24孔板中的凝膠采用梯度酒精進行脫水處理，至于掃描電鏡下拍照，但是幾個樣品都看不到細胞。覺得會不會是因為梯度脫水時，凝膠收縮，其結(jié)構(gòu)發(fā)生了較大的變化，使得細胞脫落？梯度酒精處理的時候要不要將水凝膠固定？怎么固定呢？求大蝦支招 PS：沒有采用梯度酒精處理，而是采用冷凍干燥處理的凝膠，一樣在掃描電鏡下看不到細胞。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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liuquan0814(紅舟流星代發(fā)): 金幣+4, 代扣代發(fā)金幣 2013-08-31 12:16:22
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| 固定生物材料上的細胞時戊二醛的濃度最好用3%的，濃度過高會引起水凝膠的交聯(lián)反應(yīng)；此外材料浸泡在戊二醛溶液中一般只要半小時就可以進行乙醇的梯度脫水處理了；雖然脫水后材料結(jié)構(gòu)會變化，引起細胞變形，但細胞脫落的情況比較少。。。。。。。。。。。此外，個人認為水凝膠材料比較透明，且吸水性強，脫水后會使細胞生長情況失真，可以對細胞染色后直接在熒光顯微鏡下拍照（類似免疫熒光） |
2樓2013-04-17 20:31:35
yifeng1206
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2013-04-17 22:11:38
晚香玉
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4樓2013-04-17 23:42:43
liuquan0814
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5樓2013-04-18 08:51:45
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9樓2022-11-03 11:05:18
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