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liuquan0814金蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)胞生長在凝膠后，梯度酒精脫水時凝膠的固定問題
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細(xì)胞（成纖維細(xì)胞）在水凝膠（高約為1mm）上面生長兩天后，采用戊二醛固定，隔夜處理后，PBS清洗三次。24孔板中的凝膠采用梯度酒精進(jìn)行脫水處理，至于掃描電鏡下拍照，但是幾個樣品都看不到細(xì)胞。覺得會不會是因為梯度脫水時，凝膠收縮，其結(jié)構(gòu)發(fā)生了較大的變化，使得細(xì)胞脫落？梯度酒精處理的時候要不要將水凝膠固定？怎么固定呢？求大蝦支招 PS：沒有采用梯度酒精處理，而是采用冷凍干燥處理的凝膠，一樣在掃描電鏡下看不到細(xì)胞。 |
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晚香玉
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4樓2013-04-17 23:42:43
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃酮: 金幣+1, 謝謝回帖交流 2013-04-17 21:10:08
liuquan0814(紅舟流星代發(fā)): 金幣+4, 代扣代發(fā)金幣 2013-08-31 12:16:22
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃酮: 金幣+1, 謝謝回帖交流 2013-04-17 21:10:08
liuquan0814(紅舟流星代發(fā)): 金幣+4, 代扣代發(fā)金幣 2013-08-31 12:16:22
| 固定生物材料上的細(xì)胞時戊二醛的濃度最好用3%的，濃度過高會引起水凝膠的交聯(lián)反應(yīng)；此外材料浸泡在戊二醛溶液中一般只要半小時就可以進(jìn)行乙醇的梯度脫水處理了；雖然脫水后材料結(jié)構(gòu)會變化，引起細(xì)胞變形，但細(xì)胞脫落的情況比較少。。。。。。。。。。。此外，個人認(rèn)為水凝膠材料比較透明，且吸水性強(qiáng)，脫水后會使細(xì)胞生長情況失真，可以對細(xì)胞染色后直接在熒光顯微鏡下拍照（類似免疫熒光） |
2樓2013-04-17 20:31:35
yifeng1206
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2013-04-17 22:11:38
liuquan0814
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5樓2013-04-18 08:51:45
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