 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2087 | 回復(fù): 3 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||||
forrestgump新蟲 (著名寫手)
|
[求助]
能否抑制某一特地蛋白，基因敲除方法除外。
|
||||
|
各位老師： 最近準(zhǔn)備開題了，我們老板發(fā)現(xiàn)了一個(gè)蛋白在血液含量特別高，就會(huì)的高血壓病，現(xiàn)在讓我做這項(xiàng)研究，可是我是剛?cè)腴T看的文獻(xiàn)特別少？我想請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有專門針對(duì)某一種蛋白設(shè)計(jì)的可以抑制這種蛋白的功能的技術(shù)？記得以前有人說(shuō)過(guò)PNA的可以實(shí)現(xiàn)這個(gè)功能，請(qǐng)大仙們踴躍解答，不勝感謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 專業(yè)電子書 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有165人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
凌波麗
專家顧問(wèn) (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
forrestgump: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-18 16:02:29
silicare: 金幣+10, MolEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 辛苦了 2014-02-19 10:55:54
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
forrestgump: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-18 16:02:29
silicare: 金幣+10, MolEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 辛苦了 2014-02-19 10:55:54
|
剛要下線，看到你這貼，就說(shuō)幾句了。 能否抑制某一特地蛋白，基因敲除方法除外，當(dāng)然knock in也就不說(shuō)了，本質(zhì)一樣。siRNA,miRNA引起的基因沉默，有成型的protocols。siRNA可以通過(guò)降解mRNA和引起DNA的甲基化（招來(lái)一些DNA甲基化酶），還可以引起染色質(zhì)大片段的異染色質(zhì)化導(dǎo)致基因沉默。miRNA一般是在mRNA的5’末端，有時(shí)也在mRNA的3’末端形成空間位阻導(dǎo)致基因沉默。當(dāng)然siRNA,miRNA引起的基因沉默，肯定不是100%。另外還可以通過(guò)對(duì)于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變而使得其功能喪失，最常用的一個(gè)辦法，利用目的蛋白免疫小鼠后獲得單抗（具體實(shí)驗(yàn)步驟省略），然后用顯微注射入細(xì)胞類讓其與目的蛋白質(zhì)發(fā)生免疫反應(yīng)，抑制目的蛋白質(zhì)的功能。還有：通過(guò)對(duì)目的蛋白質(zhì)加以點(diǎn)突變，改變其折疊狀態(tài)，以影響其生物功能。 下面舉個(gè)例子，是我回答別人的一個(gè)具體的實(shí)驗(yàn)課題（研究某蛋白質(zhì)的功能）的全程設(shè)計(jì)，可以參考。 動(dòng)物細(xì)胞的一種氧化還原酶在大腸桿菌中的表達(dá) 與在細(xì)胞中的定位（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與討論） 題目：用大腸桿菌表達(dá)來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶；并利用免疫熒光技術(shù)對(duì)細(xì)胞中的該蛋白進(jìn)行定位。答：這問(wèn)題由我本人設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)（方法還有很多種，我沒(méi)有都寫出來(lái)），但不是我的實(shí)驗(yàn)課題，是我在2012年的最后一天的晚上在“百度知道”（偶爾去了一趟） 回答內(nèi)蒙古大學(xué)某人的一個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)問(wèn)題，可我剛回答完，原問(wèn)題就被撤消了（⊙﹏⊙b汗）。答案不是唯一的（疏漏之處歡迎斧正）。 這不難設(shè)計(jì)。 第一步，獲得來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的基因并且將其導(dǎo)入大腸桿菌。這就是分離基因，化學(xué)合成，cDNA文庫(kù)，mRNA篩選（比如DDRT，RDA，mRNA差異顯示技術(shù),削減雜交等），鳥槍法分離基因等等；然后導(dǎo)入載體 （質(zhì)粒，用表達(dá)載體好一些，因?yàn)橄劝演d體DNA整合到大腸桿菌的基因組不太容易，整合進(jìn)去高表達(dá)還要費(fèi)不少事情）；再將載體導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞（比如氯化鈣 制備感受態(tài)大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)化載體進(jìn)入其細(xì)胞），一般在其基因之前加上強(qiáng)啟動(dòng)子。這步還包括陽(yáng)性克隆篩選和分離，大規(guī)模培養(yǎng)，產(chǎn)品收獲就算了，不要粉碎細(xì) 菌，也不要構(gòu)成分泌蛋白質(zhì)，就讓目的基因表達(dá)的蛋白質(zhì)留在大腸桿菌細(xì)胞里。這一步就是完全依據(jù)基因工程的進(jìn)本步驟而設(shè)計(jì)。 第二步，獲得抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗體。單抗的制備方法，最粗糙的方法：小鼠腹水法。其實(shí)用多克隆抗體也可以，只是效果差一些。 第三步，給單克隆抗體標(biāo)記上可以發(fā)出熒光的基團(tuán)。熒光從哪來(lái)？給偶連蛋白質(zhì)標(biāo)記上能夠發(fā)出熒光的有機(jī)染料分子不就行了�；蛘咭部梢灾苯邮褂昧孔狱c(diǎn)熒光 法，量子點(diǎn)本身也就是靠其偶聯(lián)的抗體在細(xì)胞內(nèi)定位的。量子點(diǎn)制備與實(shí)驗(yàn)方法的原理與步驟可以參見(jiàn)Methods in Molecular Biology Vol-374-Quantum Dots。這一步也下一步密切信關(guān)，做得好下一步可以省很多事情。當(dāng)然也可以給把單克隆抗體的基因偶聯(lián)上綠色熒光蛋白的基因在大腸桿菌中一同表達(dá)，兩者之 間共價(jià)鍵鏈接，但是比較麻煩。 第四步，將用免疫熒光基團(tuán)標(biāo)記的抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗體進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞中。給把單克隆抗體的基因偶聯(lián)上綠色熒光蛋白的基因在大腸桿菌中一同表達(dá)，兩者之間共價(jià)鍵鏈接，首先還要要把抗一種將抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克 隆抗體的基因分離出來(lái)導(dǎo)入大腸桿菌這也是一種實(shí)驗(yàn)方法，不過(guò)構(gòu)建基因，聯(lián)入DNA載體，導(dǎo)入細(xì)胞，陽(yáng)性克隆篩選，工作量可不小，我是不這樣實(shí)驗(yàn)的，時(shí)效比 太低。還有其他的更簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方法：直接從蛋白質(zhì)水平動(dòng)手。從外界導(dǎo)入帶有熒光標(biāo)記的抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗體蛋白質(zhì)，這又可以有好多種辦 法：一種顯微注射法，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的操作水平要求推高，而勞動(dòng)量大，像我這樣的懶人絕對(duì)不干（給錢也不干）；第二種方法讓細(xì)胞內(nèi)吞攝入蛋白質(zhì)，然后把抗來(lái)源 于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗體一起拉入細(xì)胞（去查一下大腸桿菌內(nèi)吞哪些蛋白質(zhì)），當(dāng)然要把大腸桿菌內(nèi)吞蛋白質(zhì)與抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原 酶的單克隆抗體共價(jià)鏈接在一起。怎么連？再做個(gè)融合蛋白的基因去表達(dá)出來(lái)？那多累呀，像我這樣的懶人絕對(duì)不干（給錢也不干），誰(shuí)像這樣實(shí)驗(yàn)誰(shuí)就去做，反正 我絕對(duì)拒絕如此實(shí)驗(yàn)（不當(dāng)?shù)退絼趧?dòng)力），可用分子交聯(lián)方法-------用有機(jī)試劑把兩者用化學(xué)反應(yīng)偶聯(lián)到一起不就行了嗎，有空間位阻，加個(gè)鏈接臂行了 吧，比如可以先用EDC、戊二醛等試試看，去查一下與抗體工程和酶的固定化相關(guān)的Methods inMolecular Biology ，Methods in Enzymology系列的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)。分子交聯(lián)方法當(dāng)然會(huì)出很多的混合物，用層析篩選一下，在檢測(cè)一下活性，適當(dāng)控制和調(diào)整反應(yīng)試劑和反應(yīng)條件，得到陽(yáng)性 結(jié)果不難。熒光從哪來(lái)？給偶連蛋白質(zhì)標(biāo)記上能夠發(fā)出熒光的有機(jī)染料分子不就行了�；蛘咭部梢灾苯邮褂昧孔狱c(diǎn)熒光法，量子點(diǎn)本身也就是靠其偶聯(lián)的抗體在細(xì)胞 內(nèi)定位的。量子點(diǎn)制備與實(shí)驗(yàn)方法的原理與步驟可以參見(jiàn)Methods in Molecular Biology Vol-374-Quantum Dots。第三步和第四步實(shí)際上很難說(shuō)誰(shuí)先誰(shuí)后，我是為了說(shuō)明清楚人為分開的。 第五步，單抗與來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶（抗原）相互作用�？乖c抗體相互作用并不困難，但是在細(xì)胞中要注意必須使得兩者在同一個(gè)亞細(xì)胞區(qū)室中。因?yàn)檫@題是在大腸桿菌中，沒(méi)有細(xì)胞器，也就不必再給當(dāng)克隆抗體連接上 進(jìn)入各個(gè)封閉性的細(xì)胞器的信號(hào)肽序列，比如進(jìn)入線粒體或者葉綠體或溶酶體等特異性信號(hào)肽序列。如果原問(wèn)題問(wèn)的是確定大腸桿菌表達(dá)的來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧 化還原酶在大腸桿菌的細(xì)胞的具體部位，那么這步實(shí)際上就省略了；如果原問(wèn)題問(wèn)的是確定大腸桿菌表達(dá)的來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶在原來(lái)表達(dá)它的動(dòng)物細(xì) 胞中的具體部位，那么給單抗的氨基端接上信號(hào)肽或者信號(hào)斑（后者不在氨基端）可能就是需要的（第六步再解釋為什么即使對(duì)于真核的動(dòng)物細(xì)胞也不是必須要給單 抗接上信號(hào)肽和信號(hào)斑）。給單抗接上信號(hào)肽和信號(hào)斑用融合蛋白當(dāng)然是可行的，但是工作量又大了，有沒(méi)有更爽的試驗(yàn)方法？當(dāng)然有！請(qǐng)看第六步， 第六步，確定大來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶在大腸桿菌的細(xì)胞和在原來(lái)表達(dá)它的動(dòng)物細(xì)胞中的具體部位（原題沒(méi)有說(shuō)清楚，所以對(duì)兩種細(xì)胞都要討論）。 1.確定大腸桿菌表達(dá)的來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶在大腸桿菌的細(xì)胞的具體部位。給予大腸桿菌細(xì)胞外界光源，使導(dǎo)入的熒光基團(tuán)發(fā)出特異性波長(zhǎng)的熒光， 用熒光顯微鏡直接觀察熒光所在細(xì)胞的亞細(xì)胞部位，并拍照可確定大腸桿菌表達(dá)的來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶在大腸桿菌的細(xì)胞的具體部位。 2.確定來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶在原來(lái)表達(dá)它的動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的具體部位。按第五步構(gòu)成融合蛋白質(zhì)當(dāng)然是可以的，但是等于把第一步的工作有對(duì)抗源于動(dòng) 物細(xì)胞的某一氧化還原酶的基因基本上又重復(fù)了一遍，工作量大也沒(méi)有太大必要。但是在氨基端共建連接上一段信號(hào)肽，用有機(jī)合成合成方法（比如用EDC催化氨 基與羧基縮水構(gòu)成新的肽鍵，雖然副反應(yīng)不少，但是反應(yīng)條件溫和，效率高，用層析分離收獲到所需產(chǎn)品并不難，可是信號(hào)斑在肽段中間，再用有機(jī)合成先切開再插 入信號(hào)斑序列，然后還要連接，每一步都有副反應(yīng)，每一步都要分離提純，還涉及到重折疊，即使能夠做成，勞動(dòng)量比融合蛋白絕對(duì)不小。 那怎么辦？既然困難很大，那么就另辟蹊徑，從別的實(shí)驗(yàn)途徑達(dá)到目的。做好了有熒光染料標(biāo)記的抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗體，不再加工了； 而轉(zhuǎn)向加工原來(lái)表達(dá)“來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶”的動(dòng)物細(xì)胞本身·， 將該種動(dòng)物細(xì)胞粉碎，然后分級(jí)分離提純細(xì)胞不同成分，比如離心、層析，不用太多的分離純化，對(duì)膜性封閉細(xì)胞器還是必須能夠彼此分開，因?yàn)橐右愿髯苑鬯椋?膜性封閉細(xì)胞器混在一起被粉碎就不知道液相提取液的具體來(lái)源了。然后分別對(duì)于不同提取液加入有熒光染料標(biāo)記的抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗 體，進(jìn)行免疫沉淀。發(fā)生沉淀后收集免疫沉淀物，因?yàn)榭梢允孪扔梅亲冃苑肿雍Y層析測(cè)出單抗與目的酶混合物的相對(duì)分子量，再給予不同提取液加入有熒光染料標(biāo)記 的抗來(lái)源于動(dòng)物細(xì)胞的某一氧化還原酶的單克隆抗與其抗原的復(fù)合物給予外界光源，使單抗偶聯(lián)的熒光染料發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光，進(jìn)而用熒光顯微鏡觀測(cè)，是陽(yáng)性結(jié) 果的提取液是目地酶的來(lái)源的亞細(xì)胞定位處。如果免疫沉淀物中的熒光有機(jī)染料不能夠有效吸收外界光源并且激發(fā)熒光，可以適當(dāng)加入中性鹽溶液，比如氯化鈉，拆 解開免疫復(fù)合物，并適當(dāng)稀釋。因?yàn)橛袩晒怙@微鏡的直接觀測(cè)，所以免疫沉淀可以做的稍微比較粗糙。 實(shí)際上，還有很多種實(shí)驗(yàn)方法，有很多實(shí)驗(yàn)方法不必使用免疫熒光，可能還更加簡(jiǎn)單。 Good Luck! 我只是拋磚引玉，并不是說(shuō)我的上面的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案就是最好的，更不是唯一的。 提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力，除了學(xué)習(xí)基本的實(shí)驗(yàn)原理和基礎(chǔ)理論知識(shí)外，還要注意課本中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)的基本設(shè)計(jì)方法，但是這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，可能的話要看些實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書。 在自己有條件做實(shí)驗(yàn)時(shí)多動(dòng)手多思考，而不是照貓畫虎的臨摹一遍；沒(méi)有條件自己動(dòng)手時(shí)可以仔細(xì)思考關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)總體過(guò)程，把大的問(wèn)題逐漸分解為小的問(wèn)題，再根 據(jù)掌握的知識(shí)去試圖能夠用一些實(shí)驗(yàn)手段對(duì)小的問(wèn)題加以實(shí)驗(yàn)操作性的解決，并且要考慮小的問(wèn)題的解決是在解答大的問(wèn)題過(guò)程中起到了什么具體的作用。閱讀SCI原始論文是必要的，但是沒(méi)有學(xué)好基本的基礎(chǔ)理論知識(shí)和基本的實(shí)驗(yàn)原理，看多少論文都是用海市蜃樓來(lái)炒作房地產(chǎn)，比房地產(chǎn)泡沫還玄虛。僅僅熟悉教 材上的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)沒(méi)用！--------我沒(méi)有讓誰(shuí)完全不去看經(jīng)典實(shí)驗(yàn)！實(shí)驗(yàn)技術(shù)早就超越了教材上的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)的時(shí)代，不接觸一些現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)，沒(méi)有可能 提高實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力-----------無(wú)論在考試中，還是在科研工作中。 |
2樓2013-04-18 00:07:36
凌波麗
專家顧問(wèn) (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★
forrestgump: 金幣+1 2013-04-18 16:02:47
forrestgump: 金幣+1 2013-04-18 16:02:47
|
當(dāng)然，通過(guò)抑制所研究的功能蛋白質(zhì)的上下游的活性也可以達(dá)到抑制目的蛋白質(zhì)的功能的作用。通過(guò)上面的實(shí)驗(yàn)的全程設(shè)計(jì)的舉例，雖然不是直接與樓主的課題有關(guān)，但是有關(guān)的是研究技術(shù)是相通的。另外，基因的異位表達(dá)也是一種重要的研究基因功能的方法，比如iPS cell中應(yīng)用就非常明顯。調(diào)出目的蛋白質(zhì)的上下游蛋白質(zhì)然后對(duì)上下游者加以修飾或者抑制也是抑制目的蛋白的功能的方法。 另外，讓目的蛋白質(zhì)的基因多加上些序列，引起其折疊形態(tài)改變，進(jìn)而引起功能或細(xì)胞定位改變也能夠抑制正常功能的發(fā)揮。所由以上的各種方法，都可以先在細(xì)胞水平上實(shí)驗(yàn)（原核真核細(xì)胞是需要而定），也就可參考我舉的例子的試驗(yàn)流程。呵呵。。。我上貼沒(méi)有跑題。。。。  |
3樓2013-04-18 00:19:28
starseacow
專家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +426 - MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 1217 (講師)
- 金幣: 9097.3
- 散金: 16445
- 紅花: 226
- 帖子: 4669
- 在線: 2320.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1136974
- 注冊(cè): 2010-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
- 管轄: 動(dòng)植物
4樓2013-04-18 05:00:14
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 forrestgump 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +10 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +14 | 大米飯！ 2026-03-15 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 梁成偉老師課題組歡迎你的加入 +8 | 一鴨鴨喲 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308 085701 四六級(jí)已過(guò)求調(diào)劑 +7 | 溫喬喬喬喬 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|