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peifeinini銅蟲 (正式寫手)
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[求助]
肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞提取中DNase的作用
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新手上路，盼過來人指點(diǎn)一二。 打算提取肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，paper中有提到切除后的肝臟泡在有膠原酶 IV和DNase的灌注液中弄碎，37度下?lián)u10 min，再過濾，離心…… 想問的是，在這里DNase的具體作用是什么？不用它的話影響大不大？因?yàn)楝F(xiàn)在暫時(shí)沒有這個(gè)東西，而我也看到很多paper好像也沒有用它，所以想干脆就不加了。大家有何意見和建議嗎？非常感謝。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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DNase 脫氧核糖核酸酶（亦稱DNase） 由牛胰制備的脫氧核糖核酸;脫氧核糖核酸酶;DNA酶;去氧核糖核酸酶;胰道酶;胰克氧核糖核酸酶;除氧細(xì)胞核酸酶（牛胰）;去氧細(xì)胞核酸酶； 物化性質(zhì)：?jiǎn)挝欢x：37℃，50μl緩沖液（40mM Tris-HCl （pH 7.9 at 25℃）、10mM NaCl、 6mM MgCl2、10mM CaCl2）中，每十分鐘完全降解1μg DNA的酶量為1單位。 類白色凍干粉，易溶于水，微溶于30%乙醇和丙酮，最適pH值7.8。水溶液中加入5mmol/L Ca2+或二異丙基氟磷酸（DFP）可增加其穩(wěn)定性。抑制劑有EDTA和十二烷基磺酸鈉；激活劑為二價(jià)金屬離子，Mg2+與Ca2+合用可得到最佳效果。1%水溶液在280nm處吸收系數(shù)為11.1。限制消化的平均鏈長(zhǎng)為四核苷酸，酶反應(yīng)：脫氧核糖核酸═二核苷酸-5'-磷酸+寡聚核苷酸-5'-磷酸。脫氧核糖核酸酶（DNase） 主要用途：用于降解RNA中的DNA，純化RNA；研究DNA與蛋白質(zhì)的相互作用。  用于生化研究，臨床上常用作祛痰藥，也可局部用于膿腫、血腫以及鞘內(nèi)注射治療腦膜炎。 儲(chǔ)存條件：−20℃GOY0414 LPM瓊脂 單增李氏菌的選擇性分離 250g Amresco GOY0415 Half Fraser培養(yǎng)基 李氏菌的增菌培養(yǎng) 250g Amresco GOY0416 SIM動(dòng)力培養(yǎng)基/SIM培養(yǎng)基 李氏菌動(dòng)力觀察，H抗原位相變異試驗(yàn)；硫化氫、動(dòng)力、吲哚試驗(yàn) 250g Amresco GOY0417 李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)/改良McBride瓊脂培養(yǎng)基/MMA 單增李氏菌選擇性分離 250g Amresco 芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽N-乙酰-L-酪氨酸L-酪氨酸叔丁酯L-酪氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽Thr-OtBu·HClL-蘇氨酸芐酯半草酸鹽5-氨基酮戊酸甲酯鹽酸鹽L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽D-苯芴甲氧羰基-N-epsilon-叔丁氧羰基-L-賴氨酸Fmoc-L-亮氨酸Fmoc-L-異亮氨酸N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-組氨賴氨酸N-alpha-酰門冬氨酸-4-叔丁基酯L-天冬氨酸-4-芐酯L-精氨酸乙酯二鹽酸鹽β-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽D-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽L-丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽L-丙氨酸乙酯鹽酸鹽D-苯丙氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽L-丙氨酸芐酯對(duì)GOY0252 N-乙酰-DL-蛋氨酸/N-乙酰-DL-甲硫氨酸/N-乙酰基-DL-甲硫氨酸/N-Acetyl-DL-Methionine BR，脫氧核糖核酸酶（DNase） RQ1 RNase-Free DNase from Bovine pancreas.99丁基-L-絲氨酸Fmoc-O-芐基-L-絲氨酸N-芴甲氧羰基-D-絲氨酸Fmoc-L-絲氨酸FMOC-D-苯甘氨酸Fmoc-L-苯基甘氨酸Fmoc-L-羥脯氨酸Fmoc-D-脯氨酸Fm GOY0418 EB增菌肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)/EB增菌液 單核細(xì)胞增生李氏特菌增菌 250g Amresco GOY0419 Fraser培養(yǎng)基 李氏菌的增菌培養(yǎng) 250g Amresco GOY0420 UVM培養(yǎng)基 李氏菌的增菌培養(yǎng) 250g Amresco GOY0421 LM-137瓊脂 膜濾法單增李氏菌的選擇性分離 250g Amresco GOY0422 改良緩沖蛋白胨水/MBP 李氏菌的增殖 250g Amresco GOY0423 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基 大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別 250g Amresco GOY0424 Christensen尿素瓊脂 腸桿菌、需氧放線菌、鏈球菌及非發(fā)酵培養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌等尿素酶的活性鑒定 250g Amresco GOY0425 尿素酶瓊脂基礎(chǔ)/尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 細(xì)菌脲酶檢測(cè)，腸桿菌鑒別 250g Amresco |
2樓2013-04-19 08:39:45
3樓2013-04-19 11:33:35
peifeinini
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4樓2013-04-20 13:32:54
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噢，我們實(shí)驗(yàn)室提的也沒有用DNase。取肝細(xì)胞的關(guān)鍵主要是膠原酶在體內(nèi)作用的是否充分，如果充分的話取下來之后非常好弄碎。個(gè)人感覺，弄碎時(shí)應(yīng)該無所謂膠原酶和DNase。 |
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peifeinini5樓2013-04-20 23:02:03
凌波麗
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| 單純提出肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞一般不用加DNase呀，加上DNase可能是因?yàn)楦螌?shí)質(zhì)細(xì)胞分離過程中有些細(xì)胞破碎后游離出DNA，DNase能夠切割DNA，有利于后期除去DNA污染，多少有些好處。另外，我覺得肝臟泡在有膠原酶 IV外，還應(yīng)該加些胰蛋白酶也有利于消除細(xì)胞之間的細(xì)胞間質(zhì)成分而使得肝細(xì)胞容易彼此分離。 |
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6樓2013-04-21 12:35:50
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7樓2013-04-21 13:00:18
peifeinini
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8樓2013-04-22 16:10:11
peifeinini
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9樓2013-04-22 16:10:25
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