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三書生木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求教昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)問題
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各位師兄師姐，師弟師妹，大家好。 本人小碩一枚，剛剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)，貼壁生長的昆蟲細(xì)胞，用添加10%血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，最近細(xì)胞出現(xiàn)了一些問題，在此向大家請(qǐng)教一下幾個(gè)問題。 1.2張圖片中的細(xì)胞生長狀態(tài)不好，很多亮點(diǎn)，這個(gè)是要凋亡了吧？ 2.圖片中可以看到很多細(xì)小的黑點(diǎn)（就像灰燼一樣的東西）。在倒置顯微鏡下這些小黑點(diǎn)有的不動(dòng)，有的會(huì)不停的移動(dòng)，請(qǐng)問這些小黑點(diǎn)是什么？為什么會(huì)動(dòng)？ 3.我一直比較疑惑的一個(gè)問題。在血清、不添加血清的培養(yǎng)基、添加血清的培養(yǎng)基都沒有被污染的情況下，所有細(xì)胞都被污染了，無一幸免。有人可能說是操作的問題，但是我們一直都是執(zhí)行以前的管理和操作，在這方面應(yīng)該問題不大吧。而且如果因?yàn)椴僮鞫鹞廴镜脑挘敲次廴緫?yīng)該是偶然現(xiàn)象不應(yīng)該是大概率事件�。ㄈ课廴荆＝徊嫖廴�？我們做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般都會(huì)采取更換吹管、灼燒瓶口等預(yù)防措施。但是現(xiàn)在這種污染不是出現(xiàn)一次兩次，而是多次出現(xiàn)，請(qǐng)問這個(gè)是什么原因，有何良策？ 謝謝！謝謝各位了！ 20倍鏡.JPG 10倍鏡.jpg |
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wizardfan: 應(yīng)助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 有廣告嫌疑，請(qǐng)?jiān)敿?xì)說明為什么判斷細(xì)胞有問題 2013-04-24 06:50:51
wizardfan: 應(yīng)助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 有廣告嫌疑，請(qǐng)?jiān)敿?xì)說明為什么判斷細(xì)胞有問題 2013-04-24 06:50:51
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2樓2013-04-23 10:58:49
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝分析，以后常來 2013-04-24 06:55:06
三書生: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 基本解答了我的疑問，謝謝！ 2013-04-25 09:54:15
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1、亮亮的圓形應(yīng)該是沒有貼壁的細(xì)胞，可能暫時(shí)沒貼壁，也可能是已經(jīng)死亡； 2、黑色的小點(diǎn)，如果是游來游去的，應(yīng)該是細(xì)菌污染，如果是原地打轉(zhuǎn)，可能是黑膠蟲。 如果你試過在干凈的培養(yǎng)瓶中，沒有細(xì)胞，只有培養(yǎng)基或者血清，像養(yǎng)細(xì)胞一樣在37℃培養(yǎng)箱中過夜后，不會(huì)出現(xiàn)黑色小點(diǎn)的話，應(yīng)該是您買的細(xì)胞本身是污染的 |
3樓2013-04-23 13:18:31
小雨莎莎
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-04-24 06:55:25
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| 我們也養(yǎng)sf-9，不知道你們傳代是怎么做的，我們是用細(xì)胞刮刀的，所以每一次傳代的話刮一次就損傷一次，因此第二天會(huì)看到皿底部會(huì)有很多黑色的碎片，我看著跟你的圖片的小黑點(diǎn)有點(diǎn)像，這個(gè)細(xì)胞貼壁比較慢，因此我們一般都是傳代之后至少等兩天才會(huì)換液的。另外就是這個(gè)細(xì)胞很容易污染，所以我們一般都用雙倍的雙抗加入培養(yǎng)基中。我們的培養(yǎng)基是自己溶解過濾的TC-100培養(yǎng)基 |
4樓2013-04-23 19:20:50
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我之前養(yǎng)的都是細(xì)胞株，這次到新的公司養(yǎng)昆蟲細(xì)胞SF9、SF21、Hight 5，不用胰酶消化，老板讓用手拍瓶壁，在實(shí)驗(yàn)室里養(yǎng)，只有操作臺(tái)照紫外，外面是空曠的實(shí)驗(yàn)室，都不照紫外，不過沒污染，也不加雙抗培養(yǎng)基里，自己都覺得很慶幸。 1.黑點(diǎn)，應(yīng)該是是污染，如果培養(yǎng)基變黃等，可能是細(xì)菌，會(huì)大量繁殖的。小黑點(diǎn)一般認(rèn)為是黑膠蟲，也得看情況，血清買好點(diǎn)的吧，進(jìn)口或分裝的，國內(nèi)的還是不要用，要不就滅活，分裝后在菌試看看。 |
5樓2013-06-05 14:35:52
三書生
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