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三書生木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求教昆蟲細胞培養(yǎng)問題
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各位師兄師姐，師弟師妹，大家好。 本人小碩一枚，剛剛接觸細胞培養(yǎng)，貼壁生長的昆蟲細胞，用添加10%血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，最近細胞出現(xiàn)了一些問題，在此向大家請教一下幾個問題。 1.2張圖片中的細胞生長狀態(tài)不好，很多亮點，這個是要凋亡了吧？ 2.圖片中可以看到很多細小的黑點（就像灰燼一樣的東西）。在倒置顯微鏡下這些小黑點有的不動，有的會不停的移動，請問這些小黑點是什么？為什么會動？ 3.我一直比較疑惑的一個問題。在血清、不添加血清的培養(yǎng)基、添加血清的培養(yǎng)基都沒有被污染的情況下，所有細胞都被污染了，無一幸免。有人可能說是操作的問題，但是我們一直都是執(zhí)行以前的管理和操作，在這方面應該問題不大吧。而且如果因為操作而引起污染的話，那么污染應該是偶然現(xiàn)象不應該是大概率事件�。ㄈ课廴荆＝徊嫖廴�？我們做實驗的時候一般都會采取更換吹管、灼燒瓶口等預防措施。但是現(xiàn)在這種污染不是出現(xiàn)一次兩次，而是多次出現(xiàn)，請問這個是什么原因，有何良策？ 謝謝！謝謝各位了！ 20倍鏡.JPG 10倍鏡.jpg |
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 昆蟲表達體系 |
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小雨莎莎
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗 2013-04-24 06:55:25
三書生: 金幣+1, ★★★很有幫助, 分析的很好，謝謝！以后常交流！ 2013-04-25 09:55:19
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| 我們也養(yǎng)sf-9，不知道你們傳代是怎么做的，我們是用細胞刮刀的，所以每一次傳代的話刮一次就損傷一次，因此第二天會看到皿底部會有很多黑色的碎片，我看著跟你的圖片的小黑點有點像，這個細胞貼壁比較慢，因此我們一般都是傳代之后至少等兩天才會換液的。另外就是這個細胞很容易污染，所以我們一般都用雙倍的雙抗加入培養(yǎng)基中。我們的培養(yǎng)基是自己溶解過濾的TC-100培養(yǎng)基 |
4樓2013-04-23 19:20:50
感謝參與，應助指數(shù) +1
wizardfan: 應助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 有廣告嫌疑，請詳細說明為什么判斷細胞有問題 2013-04-24 06:50:51
wizardfan: 應助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 有廣告嫌疑，請詳細說明為什么判斷細胞有問題 2013-04-24 06:50:51
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2樓2013-04-23 10:58:49
【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+5, BioEPI+1, 謝謝分析，以后常來 2013-04-24 06:55:06
三書生: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 基本解答了我的疑問，謝謝！ 2013-04-25 09:54:15
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1、亮亮的圓形應該是沒有貼壁的細胞，可能暫時沒貼壁，也可能是已經(jīng)死亡； 2、黑色的小點，如果是游來游去的，應該是細菌污染，如果是原地打轉(zhuǎn)，可能是黑膠蟲。 如果你試過在干凈的培養(yǎng)瓶中，沒有細胞，只有培養(yǎng)基或者血清，像養(yǎng)細胞一樣在37℃培養(yǎng)箱中過夜后，不會出現(xiàn)黑色小點的話，應該是您買的細胞本身是污染的 |
3樓2013-04-23 13:18:31
5樓2013-06-05 14:35:52
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