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929323銅蟲 (小有名氣)
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WB中的NF-kB的趨勢如此怪異�。。。。。。。。。。。�！ 已有1人參與
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各位蟲友們，小弟我用某種藥物誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，然后跑了WB，結(jié)果磷酸化的NF-kB的趨勢實(shí)在是怪異，4，8，12，24小時(shí)的誘導(dǎo)中唯獨(dú)8小時(shí)的完全沒有磷酸化的NF-kB,我平行做了好多個(gè)，也重復(fù)做了好多次，每次都這樣，問問各位蟲友，有沒有經(jīng)歷過這樣的情況的，可否給個(gè)可能的解釋呢？ Screen Shot 2013-04-26 at 7.48.20 PM.png |
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929323
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3樓2013-04-26 20:53:18
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2樓2013-04-26 20:07:23
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4樓2013-04-26 21:12:43
cicelyzh
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5樓2013-04-27 08:58:14
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6樓2013-04-27 09:46:10
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7樓2013-04-27 11:05:38
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【答案】應(yīng)助回帖
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929323(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助交流！ 2013-04-28 02:46:26
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上樣一般不能按體積，需要做蛋白定量，然后上同樣微克數(shù)的蛋白。內(nèi)參表達(dá)量差不多是什么概念？一般是需要一樣，對目標(biāo)蛋白和內(nèi)參都要做一個(gè)線性梯度，確定抗體線性工作范圍，然后把目標(biāo)蛋白和內(nèi)參的灰度分別定量，然后做目標(biāo)蛋白對內(nèi)參的相對含量。 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，如果是重復(fù)結(jié)果的話，你可能需要增加取樣點(diǎn)。比方說做4,6,8,12小時(shí)。此外，你做的是磷酸化的NF-kB，有可能的話最好對樣品做總NF-kB的定量。 |
8樓2013-04-27 14:17:48
mamadexiao
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9樓2013-04-27 20:32:16
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10樓2013-06-05 11:58:05
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