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某人zy銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
3'race 電泳圖問(wèn)題
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這是我跑的一次3'race電泳圖，從左到右的順序是marker、3’ outer、3‘ inner、一個(gè)只加了GSP的陰性對(duì)照、我的3’反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、5‘反轉(zhuǎn)錄引物。 這兩張圖的一塊膠的不同曝光程度，亮一點(diǎn)的可以看到3’outer和陰性對(duì)照、5‘反轉(zhuǎn)錄那里有東西，但是暗一點(diǎn)的就看不到。 我的問(wèn)題是：1、為什么3’outer，那里是幾條分開(kāi)的帶，但是我的inner確變成了彌散的了呢？是因?yàn)槲襥nner的退火溫度比outer的低嗎，因?yàn)楫?dāng)時(shí)設(shè)計(jì)引物的時(shí)候，引物的退火溫度就比較低，只有53.8。 2、陰性對(duì)照本身是不應(yīng)該出現(xiàn)擴(kuò)增條帶的，那出現(xiàn)了會(huì)產(chǎn)生什么錯(cuò)誤呢？ 3、因?yàn)樽鲞^(guò)一次5’race，沒(méi)做成功，就想通過(guò)跑一下5‘ 的反轉(zhuǎn)錄引物看看模板好不好，因?yàn)榱可伲灾患恿?ul的，所以感覺(jué)帶很淺，幾乎都看不到了，不知道這個(gè)方法對(duì)不對(duì)，大俠們是怎樣檢驗(yàn)提出來(lái)的結(jié)果好不好的呢？我用的是TAKARA的盒子。 請(qǐng)求各位大俠幫幫忙，看看，不勝感激~~~ 20130427 3\'.jpg 20130427 3\'-1.jpg |
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某人zy
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2樓2013-04-28 19:40:29
zhanglinxia
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4樓2013-05-30 16:02:45
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