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[求助]
新手SSR，不會區(qū)分目的條帶，求幫助
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1、SSR體系 10×Taq Buffer(15mM／L Mgcl2) 1.5ul 5 umol／L 引物 各1ul 2U／ul 酶 0.5ul 2.5 dNTPs 1ul 50ng／ul DNA 0.4ul 補水至 15ul 擴增程序 94℃ 3min 94℃ 30s 55℃ 60s 72℃ 90s 循環(huán)35次 72℃ 7min 4℃保存 2、 跑膠是 8 %非變性聚丙烯凝膠， 280V 70min 加3ul上樣緩沖液，點樣3ul 3、染色是銀染法 為什么我的目的條帶都聚集在一塊，模糊著看不清楚。非特異性條帶也多？ |
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wuxingbo1986
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wuxingbo1986
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從你的圖發(fā)現(xiàn)幾點問題： 凝膠有斷裂現(xiàn)象，說明可能制膠的時候各個藥品沒有充分混勻，成分不均一會容易斷膠； 底邊很不整齊，說明瓊脂糖封板的時候可能溫度稍低或濃度過大，造成封板膠界面不平滑，這也是膠容易斷的一個誘因； 條帶差點就跑穿了，該電壓下跑的時間稍長，最好是降低電壓，增加電泳時間； 條帶略有彌散，條帶間區(qū)分不明顯，可以通過降低電壓使條帶壓的更細一些，進一步提高分辨率； 從梳孔來看，凝膠放的時間稍長，夏天氣溫高空氣干燥，建議不要放置太長時間； 條帶分辨率的問題，換用25齒的大梳子跑出來的圖要漂亮得多，分辨率立馬提升； 還是分辨率的問題，條件允許的話建議使用大板，泳道30cm左右的那種電泳槽，條帶區(qū)分度會提高很多的。 希望對你有用。 碼字不容易，內(nèi)容更是經(jīng)驗之談，看著賞點幣吧，多謝啦  |
8樓2013-06-16 22:59:32
9樓2013-06-18 21:42:50
我不是分割線
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10樓2017-09-07 09:53:31
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