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[交流]
6%變性聚丙酰胺凝膠電泳SSR引物篩選 已有6人參與
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我是SSR引物篩選新手，有好多問(wèn)題呀，請(qǐng)各位高手指點(diǎn)迷津~ （1）我是跑的六一廠24B型號(hào)，很小的那種垂直電泳槽，染色時(shí)膠要與玻璃板脫離，我做的是1mm的6%變性聚丙烯酰胺凝膠，在固定、染色、顯色的過(guò)程中要轉(zhuǎn)移凝膠，膠很容易就弄碎了，請(qǐng)問(wèn)有什么好方法可以防止膠塊碎裂��？ （2）我用的500ml的顯色液，將兩塊膠一起染色，顯色液中包括15g的Na2CO3，750ul的甲醛溶液和50ul的硫代硫酸鈉，我是先將Na2CO3溶解在500ml的蒸餾水中，放入冰箱冷卻，拿出來(lái)后再加入甲醛和硫代硫酸鈉。在顯色過(guò)程中顯色不均是什么原因�。烤褪菞l帶有的出現(xiàn)的早有的出現(xiàn)的晚，最后導(dǎo)致有的染的特別深，有的染的特別淺。 （3）我用的方法都與之前師兄師姐跑的那種最大的玻璃板是一致的，只是因?yàn)槟z更小，所以我用的試劑都按一定比例縮小了，就如上面的顯色液的配方，縮小了1/4，這樣做可行嗎？ 問(wèn)題還有很多，急需各位幫助，謝謝�。� |
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游俠892
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2樓2012-07-01 10:05:43
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1.我的配方是1LPAGE中含420g的尿素和150ml的丙烯酰胺/雙丙烯酰胺（19:1）原液，100ml的10xTBE。之前師姐跑大板是用的這個(gè)配方，她用著沒(méi)問(wèn)題。但我也不清楚換做我這種小板會(huì)不會(huì)有什么問(wèn)題··· 2.‘膠的厚薄不一’我覺(jué)得應(yīng)該不可能，我兩塊玻璃之間都是由一樣厚度的膠條隔開(kāi)的，下方?jīng)]有放膠條，除了插梳子的那一面我都用膠帶封好了，也沒(méi)見(jiàn)漏膠.在凝膠時(shí)也感覺(jué)放平了··· 3.就是濃度沒(méi)變，只是按比例減少的意思。不知道這樣轉(zhuǎn)移使用本身有木有問(wèn)題··· |
3樓2012-07-01 16:12:40
蟲蟲博士
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4樓2012-07-02 14:14:57
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5樓2012-07-02 14:20:16
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6樓2012-07-02 14:22:50
7樓2012-07-02 19:09:37
謝謝~ 8樓2012-07-02 19:11:46
9樓2012-07-02 19:14:40
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10樓2012-07-08 15:38:40
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