 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2357 | 回復(fù): 14 | |||||
[交流]
畢赤酵母轉(zhuǎn)化后遺傳霉素篩選問題
|
|||||
| 大家好，這次做了一次酵母的點轉(zhuǎn)化實驗，GS115菌株，ppic9k質(zhì)粒，先在MD平板上長起來之后，方法一：用牙簽挑上幾十個單克隆轉(zhuǎn)移到0.5mg/ml的遺傳霉素G418平板上進行第一個濃度的初篩，3天了，還沒東西，著急啊�。�！方法二：用無菌水把MD平板上的菌落洗下來，然后涂在0.5mg/ml的遺傳霉素G418平板上，這里我想問一下涂G418平板時菌濃度是不是要特別注意，遺傳霉素對細胞密度很敏感？？？？？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 | 蛋白表達純化鑒定精華 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有153人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 有關(guān)畢赤酵母的平板篩選
已經(jīng)有11人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
南方科技大學(xué)納米-飛秒-超快動力學(xué)課題組---誠聘博士后/助理研究員
+1/182
-
研究生招生
+5/135
-
資源利用與植物保護專碩
+1/86
-
南方科技大學(xué)王鵬團隊誠聘藥物化學(xué)、化學(xué)探針、藥物遞送博士后
+1/79
-
【上海調(diào)劑急錄】代碼1007/1055/0806/0703./0780./0836等速點！！
+1/46
-
天津理工大學(xué)功能晶體研究院（晶體材料全國重點實驗室）杰青團隊招收2026年碩士研究生
+1/43
-
湖北師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院招收調(diào)劑
+1/41
-
中國石油大學(xué)（北京）國家級大人才團隊博士招生1名：化學(xué)、材料、石油工程：油田化學(xué)
+1/36
-
浙江省人民醫(yī)院博士后崗位招聘
+1/33
-
濟南大學(xué)水利與環(huán)境學(xué)院趙艷俠教授簡介
+1/27
-
煤炭科學(xué)研究總院招收2026年生態(tài)學(xué)專業(yè)碩士調(diào)劑生1名
+1/21
-
麗水學(xué)院，材料與化工專業(yè)
+1/13
-
申博的看過來，湖南農(nóng)大2026年農(nóng)藥學(xué) 緊急 補招一名博士研究生，時間緊迫
+1/12
-
西安工程大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院能源環(huán)境催化與先進材料課題組招生
+1/9
-
重慶工商大學(xué) 教育部研究中心招收化工/環(huán)境/材料/石油/機械方向2026年調(diào)劑研究生
+1/9
-
南京林業(yè)大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院柏惺峰課題組誠聘科研助理、水杉英才E類/F類青年教師或博后
+1/6
-
2026年云南大學(xué)青拔課題組招收地理學(xué)，大氣科學(xué)、資源與環(huán)境等專業(yè)研究生
+1/4
-
長江師范學(xué)院電子信息碩士和學(xué)科物理碩士調(diào)劑招生
+1/3
-
長江師范學(xué)院化學(xué)工程方向接收大量調(diào)劑考生
+1/2
-
杭州電子科技大學(xué) 磁電功能材料創(chuàng)新團隊 招收碩士調(diào)劑生
+1/1
★ ★
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
cuicchao(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-05-04 19:28:28
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
cuicchao(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-05-04 19:28:28
| 補充一下，其實第二種洗平板的方法也是有其優(yōu)勢的，挑單克隆畢竟不能將所有高拷貝轉(zhuǎn)化子一網(wǎng)打盡，這是挑單克隆的弊端，往往很可能你會錯過那些最高拷貝的克隆，而洗脫后涂布，只要你G418梯度設(shè)置合理、寬泛，就一定能篩到最高拷貝的克隆，我們實驗室就是這么做的。第一種方法當然會比較純，這個確實是一個優(yōu)勢；但，絕大部分用畢赤酵母表達系統(tǒng)的實驗都是為了得到高拷貝，這是最終極的目標；不過，如果樓主有足夠的耐心與時間，還有足夠的G418，完全可以把所有克隆都挑出來，但這個確實很費時費力。兩種方法各有優(yōu)缺點，不能一概而論，更不能執(zhí)其一端，要依實際情況靈活選擇應(yīng)用。 |
9樓2013-05-04 11:51:25
7樓2013-05-02 14:23:47
★ ★
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，鼓勵應(yīng)助，分子生物版塊期待你的更多精彩。同樣期待你更詳細的應(yīng)助指導(dǎo)。 2013-05-02 12:04:15
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，鼓勵應(yīng)助，分子生物版塊期待你的更多精彩。同樣期待你更詳細的應(yīng)助指導(dǎo)。 2013-05-02 12:04:15
| 可以嘗試不同濃度的G418平板，0.25mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,我們實驗室都做到2.0,3.0mg/L,高抗的一般長的是比較慢，可以第四天查看一下。另外建議挑轉(zhuǎn)化平板克隆，不建議涂菌液，因為嚴格意義上講涂菌液長出來的克隆同一克隆幾率會比較大，就是說一個轉(zhuǎn)化平板上的高拷貝克隆可以在G418長出N個克隆，篩選就失去了意義 |
5樓2013-05-02 11:05:17
6樓2013-05-02 11:23:09
10樓2013-05-04 12:09:01
11樓2013-12-16 16:13:05
12樓2013-12-19 09:49:41
簡單回復(fù)
2013-05-01 13:21
回復(fù)
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
gzl99013樓
2013-05-01 13:26
回復(fù)
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
祝福祝福祝福祝福祝福祝福！
2013-05-01 22:28
回復(fù)
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
haixiawu8樓
2013-05-03 00:04
回復(fù)
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
夢想天行13樓
2016-11-12 14:57
回復(fù)
cuicchao(金幣+1): 謝謝參與
， 發(fā)自小木蟲Android客戶端
夢想天行14樓
2016-11-12 14:57
回復(fù)
夢想天行15樓
2017-01-21 11:33
回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 cuicchao 的主題更新
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +17 | land xuxu 2026-03-26 | 17/850 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +5 | hanamiko 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 262求調(diào)劑 +7 | ZZ..000 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
[考研] 085601一志愿西北工業(yè)大學(xué)初試346 +4 | 085601初試346 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工專碩378求調(diào)劑 +3 | 塔比烏斯 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩求調(diào)劑 +8 | hyl3153942 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 367求調(diào)劑 +5 | 芋泥啵�！� 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +4 | 加油a李zs 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +5 | Sanmu-124 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +5 | secret0328 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿211院校 344分 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)學(xué)碩，求調(diào)劑 +5 | 丶風雪夜歸人丶 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 26申博 +3 | 加油沖��！ 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | lim0922 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|