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[求助]
如何提高核酸雜交特異性？（各位大神點(diǎn)點(diǎn)這）
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問：如何提高核酸雜交特異性？ 小白很急，請(qǐng)各位大神搭手相救  |
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諸葛小汐
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃小怪(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 非常好的建議！ 2013-05-04 01:32:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃小怪(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 非常好的建議！ 2013-05-04 01:32:51
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首先引物設(shè)計(jì)上就要保證比較嚴(yán)格的配對(duì)，如果是文獻(xiàn)里面的最好在NCBI做下BLAST，自己設(shè)計(jì)的推薦PP5和oligo評(píng)估下。在做PCR過程中，溫度越高對(duì)引物特異性要求越高，一般都可以計(jì)算出引物的退火溫度，做個(gè)梯度篩選出最好的。如果引物提高溫度特異性仍舊不好，可以試著加少許DMSO等，這些東西可以提高引物特異性。小生不才，都是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，歡迎交流指點(diǎn) [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2013-05-04 01:10:14
3樓2013-05-04 09:33:00
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