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關(guān)于離子交換再生的問(wèn)題��！疑惑�。�！ 已有3人參與
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DEAE Sepharose FF用了很久了，但有個(gè)問(wèn)題一直想不明白。 我是用來(lái)分離蛋白質(zhì)的，通常緩沖液pH8.5-9.0，讓蛋白質(zhì)帶負(fù)電，結(jié)合后用NaCl洗脫，之后是再生，通常用高濃度的NaCl或低濃度的NaOH洗脫。 問(wèn)題是：用NaCl或NaOH再生時(shí)，Cl-t和OH-離子已經(jīng)和交換基團(tuán)結(jié)合滿了，再上樣蛋白質(zhì)時(shí)怎么又能和蛋白質(zhì)結(jié)合呢？可能是蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(qiáng)吧。如果是蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(qiáng)，那怎么又能用NaCl或NaOH洗脫下來(lái)呢？ 疑惑�。。� |
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會(huì)思想的蘆葦
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| 吸附時(shí)蛋白質(zhì)所帶的電荷會(huì)先構(gòu)成競(jìng)爭(zhēng)性吸附，在洗脫時(shí)氯化鈉又和蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)性吸附，氯化鈉濃度越高競(jìng)爭(zhēng)力越強(qiáng)，所以吸附得越緊的蛋白質(zhì)在越高的氯化鈉濃度時(shí)被洗脫。鹽離子濃度是最常用的洗脫方式，除非迫不得已就別用氫氧化鈉，因?yàn)闅溲趸c是強(qiáng)堿，得控制好，雖然不是所有蛋白質(zhì)都不能耐受，但終歸是會(huì)提高操作難度的。 |
3樓2013-05-07 00:35:09
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4樓2022-02-10 03:36:53
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5樓2022-02-10 03:37:29
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