 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2109 | 回復(fù): 12 | ||
[求助]
TD-PCR做出來(lái)?xiàng)l帶很多怎么辦，求高人指點(diǎn)
|
|
本人新手，做微藻多樣性的，最近開始做PCR，跟著一篇文獻(xiàn)里的方法做。 文獻(xiàn)里用的是TD-PCR，程序是這樣說(shuō)的“10 cycles of 94° for 15s，60 to 51° for 30s，72°for 2min。Followed by 25 cycles of 94° 15s，55°for 30 to 54s and 72° for 2min and final extension of 72° 7min”，如果我沒(méi)理解錯(cuò)的話這句話的意思是前10個(gè)循環(huán)退火溫度從60逐漸降到51，每個(gè)循環(huán)降1°，后25個(gè)循環(huán)退火溫度為55°，但時(shí)間從30s逐漸增加到54s，每循環(huán)增加1s。 可是P出來(lái)的結(jié)果有很多條帶，目的片段為1070bp，而跑膠跑出來(lái)有2000bp左右的，有1000bp左右的，還有900多bp左右的，而且那個(gè)1000多bp的跑出來(lái)也不齊，想請(qǐng)教前輩們有沒(méi)有碰到過(guò)這種情況的，如何解決或者該往哪方面思考問(wèn)題出在哪里。 引物是按文獻(xiàn)合成的，Tm值分別為53.1和46，PCR體系也是按文獻(xiàn)來(lái)的，用的酶也是同一公司的。  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有131人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求高人指點(diǎn)我做的二茂鐵 循環(huán)伏安曲線 的疑問(wèn)？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)qpcr問(wèn)題，擴(kuò)增效率太高！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn):環(huán)境工程專業(yè)，做的卻是分析，公務(wù)員考試怎么報(bào)？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)國(guó)外工程管理類的EI期刊比較好中的
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 今天遇見(jiàn)一數(shù)學(xué)題，做不來(lái)，求高人指點(diǎn)！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于DMFDMA的反應(yīng)，求高人指點(diǎn)
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)《數(shù)字?jǐn)z影測(cè)量學(xué)》這本書應(yīng)該怎么學(xué)？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 注塑加工PE100 斷裂伸長(zhǎng)率居然只有40多 求高人指點(diǎn)
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)3Cr13在焊接后的回火溫度是多少
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 圣誕前文章莫名其妙被拒，求高人指點(diǎn)該如何應(yīng)對(duì)
已經(jīng)有27人回復(fù)
- AFLP酶切連接 求高人指點(diǎn)啊
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)用matlab求解非線性方程組，解決了追加100金幣；
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)：哪些建材期刊不收版面費(fèi)啊？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 拍了一個(gè)碳纖維板0°拉伸斷面圖，可是不知道如何分析，求高人指點(diǎn)迷津
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 重金求高人指點(diǎn)-法國(guó)公派讀博簽證辦理
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Linux Gaussian09 無(wú)法安裝。。求高人指點(diǎn)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)�。�！食品類綜述投稿？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn) 魯棒控制怎么學(xué)習(xí)
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助】怎么抑制混凝土泛堿？求高人指點(diǎn)
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求高人指點(diǎn)上海戶口的問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
bullfrog325
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 193 (高中生)
- 金幣: 2880.3
- 散金: 200
- 紅花: 24
- 帖子: 744
- 在線: 269.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1864929
- 注冊(cè): 2012-06-20
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lyaikele(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓�(lè)每一天鼓勵(lì)蟲子來(lái)到生物版塊交流，期待你的精彩1 2013-05-09 08:15:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lyaikele(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓�(lè)每一天鼓勵(lì)蟲子來(lái)到生物版塊交流，期待你的精彩1 2013-05-09 08:15:03
|
看上去是非特異的了(如果樓主用的模板和文獻(xiàn)里一樣的話), 引物特異性怎樣? 可以加長(zhǎng)么? 46C的那條Tm感覺(jué)低了. 如果必須用文獻(xiàn)里的引物的話建議把溫度升高吧. 另外72C 2min減少到40s, 這個(gè)時(shí)間搞定1k的產(chǎn)物綽綽有余. |
2樓2013-05-09 03:39:51
德國(guó)工兵鏟
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 54 (初中生)
- 金幣: 894.4
- 散金: 10
- 紅花: 2
- 帖子: 168
- 在線: 102.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 581720
- 注冊(cè): 2008-07-18
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
3樓2013-05-09 08:57:23
|
引物是跟文獻(xiàn)里一樣的，特異性沒(méi)有驗(yàn)證過(guò)，不過(guò)出來(lái)文章了應(yīng)該不至于差吧。 另外，弱弱的問(wèn)一下既然作者設(shè)置了這個(gè)溫度應(yīng)該也是經(jīng)過(guò)摸索后的最佳溫度，如果擅自提高溫度即使是得到了條帶就一定是目的條帶嗎？還有延長(zhǎng)速度一般大概是1kb/1min，通常這個(gè)時(shí)間的設(shè)置都會(huì)有點(diǎn)富余，而且通過(guò)延長(zhǎng)時(shí)間來(lái)強(qiáng)制限制片段大小結(jié)果可信嗎？ |
4樓2013-05-09 09:23:00
5樓2013-05-09 09:23:39
6樓2013-05-09 09:25:11
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
7樓2013-05-09 09:30:19
德國(guó)工兵鏟
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 54 (初中生)
- 金幣: 894.4
- 散金: 10
- 紅花: 2
- 帖子: 168
- 在線: 102.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 581720
- 注冊(cè): 2008-07-18
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
8樓2013-05-09 09:32:13
9樓2013-05-09 09:44:55
zhenwuhuang
至尊木蟲 (文學(xué)泰斗)
- 應(yīng)助: 4351 (副教授)
- 金幣: 10192.3
- 散金: 1
- 紅花: 137
- 帖子: 65925
- 在線: 2433.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 2227382
- 注冊(cè): 2013-01-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 人類營(yíng)養(yǎng)
10樓2013-05-09 10:12:54
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 lyaikele 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +8 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +7 | vv迷 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +7 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 26研0 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0805 316求調(diào)劑 +3 | 大雪深藏 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +3 | 北道巷 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 勇敢的小吳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|