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TD-PCR做出來條帶很多怎么辦，求高人指點
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本人新手，做微藻多樣性的，最近開始做PCR，跟著一篇文獻里的方法做。 文獻里用的是TD-PCR，程序是這樣說的“10 cycles of 94° for 15s，60 to 51° for 30s，72°for 2min。Followed by 25 cycles of 94° 15s，55°for 30 to 54s and 72° for 2min and final extension of 72° 7min”，如果我沒理解錯的話這句話的意思是前10個循環(huán)退火溫度從60逐漸降到51，每個循環(huán)降1°，后25個循環(huán)退火溫度為55°，但時間從30s逐漸增加到54s，每循環(huán)增加1s。 可是P出來的結(jié)果有很多條帶，目的片段為1070bp，而跑膠跑出來有2000bp左右的，有1000bp左右的，還有900多bp左右的，而且那個1000多bp的跑出來也不齊，想請教前輩們有沒有碰到過這種情況的，如何解決或者該往哪方面思考問題出在哪里。 引物是按文獻合成的，Tm值分別為53.1和46，PCR體系也是按文獻來的，用的酶也是同一公司的。  |
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