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[求助]
毛狀根 培養(yǎng)
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各位蟲(chóng)友好，依舊還是那個(gè)做毛狀根死活做不出來(lái)的家伙。。。 這里很像問(wèn)下各位，毛狀根的培養(yǎng)，會(huì)不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性？ 我的根長(zhǎng)出來(lái)的，可能形態(tài)上比較像毛狀根，但會(huì)不會(huì)不是毛狀根？（因?yàn)檫M(jìn)行PCR鑒定，毛狀根沒(méi)有出現(xiàn)rolC基因，而農(nóng)桿菌A4的陽(yáng)性對(duì)照卻在500bp有條帶出現(xiàn)） 現(xiàn)在就覺(jué)得自己培養(yǎng)出來(lái)的毛狀根是假的。。。第三張PCR的圖片，亮帶是我的陽(yáng)性Ri質(zhì)粒的對(duì)照，旁邊就是我的毛狀根，啥都木有。。。。。。 求助各位。。。。 P1000940.JPG P1000986.JPG 1.png |
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starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 這種問(wèn)題以前我也遇到過(guò)，首先樓主可以檢查毛根DNA提取，在PCR時(shí)可以考慮做個(gè)毛根的陽(yáng)性對(duì)照（找個(gè)肯定能從毛根DNAP出來(lái)的，譬如植物某些保守基因）；其次，相較于正常根，毛根生長(zhǎng)非�？焖伲瑳](méi)有向地性，而且在培養(yǎng)基中不需要外源的激素，不知道樓主的培養(yǎng)體系如何？最后，如果從生長(zhǎng)狀態(tài)上看是毛狀根，但PCR始終不理想，如果條件允許，還可以通過(guò)薄層層析檢測(cè)冠癭堿來(lái)輔助判斷。 |
Bella0224
2樓2013-05-09 16:14:20
3樓2013-05-10 10:02:44
starseacow
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4樓2013-05-10 16:37:09
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我轉(zhuǎn)到MS的液體培養(yǎng)基，然后沒(méi)什么大變化，不像文獻(xiàn)上說(shuō)的長(zhǎng)的像頭發(fā)一樣，但是我之前提取的時(shí)候，被侵染的葉片根附近有小小的瘤，很像冠癭瘤，因此我覺(jué)得我誘導(dǎo)的應(yīng)該是毛狀根，但是PCR就是沒(méi)結(jié)果。。。 我單獨(dú)把陽(yáng)性對(duì)照拿出來(lái)P來(lái)著，條件什么的都摸出來(lái)了，同樣的條件，同樣的體系，目的條帶就是木有。。。。 我用的微量DNA提取毛狀根DNA，濃度還挺高的，700多納克/微升，可是就是木有條帶。。。 現(xiàn)在特別痛苦，做了快一年了，就是出不來(lái)。。。 |
5樓2013-05-10 17:29:32
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6樓2013-05-10 17:55:44
7樓2013-05-12 14:35:22
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8樓2013-05-12 19:12:48
xuehongbai
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9樓2013-05-25 23:33:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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1 你參考的是什么文獻(xiàn)，有些中英文文獻(xiàn)僅可參考不可盡信 2 R1601應(yīng)該問(wèn)題不大，可以誘導(dǎo)出毛根，但不同菌株對(duì)不同物種侵染效率不同，你應(yīng)該首先確認(rèn)你擁有的R1601曾被用于成功誘導(dǎo)別的植物 3 沒(méi)有DNA條帶，不一定不是毛根，你的檢測(cè)手段是否有問(wèn)題，需要一步步分析 4 沒(méi)有激素的培養(yǎng)基上，非毛根無(wú)法繼續(xù)快速生長(zhǎng)的，這是最簡(jiǎn)單的判別法。至于抗生素選擇，取決于你選擇的具體菌種特點(diǎn)的。 |
10樓2013-05-26 03:40:54
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