 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (1148)
- >考研 (193)
- >導(dǎo)師招生 (143)
- >基金申請(qǐng) (22)
- >考博 (14)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (11)
- >休閑灌水 (10)
- >碩博家園 (8)
- >博后之家 (5)
- >招聘信息布告欄 (4)
- >論文道賀祈福 (4)
- >復(fù)合材料 (2)
- >學(xué)術(shù)會(huì)議 (2)
- >教師之家 (2)
- >找工作 (2)
- >專(zhuān)業(yè)外語(yǔ) (1)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 968 | 回復(fù): 3 | ||||
iamvivien新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
western結(jié)果跟考馬斯蘭，質(zhì)譜結(jié)果不符合！
|
|
化學(xué)背景的生物新人跪求大家指點(diǎn)！��！是這樣的，合成的drug固定到dynabeads上面后，跟空白組blank beads對(duì)照跑膠，然后找出特異蛋白帶，跑了質(zhì)譜，發(fā)現(xiàn)一個(gè)已知應(yīng)該結(jié)合的蛋白，特異性結(jié)合到我的probe上面，這個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)做了多遍，一直特異性很好，沒(méi)有在空白beads上面發(fā)現(xiàn)。然后訂了此蛋白的一抗，然后又重復(fù)實(shí)驗(yàn)，western結(jié)果讓我真的哭了出來(lái)。。�？瞻捉M跟實(shí)驗(yàn)組都有一個(gè)很明顯的band！ 考馬斯蘭染色的時(shí)候也是發(fā)現(xiàn)空白組有非特異結(jié)合，但是明顯實(shí)驗(yàn)組band更intensive! 然后查了很多資料，說(shuō)western的一抗敏感度強(qiáng)，可以檢測(cè)pg的蛋白，但是質(zhì)譜要至少ng的蛋白量才能檢測(cè)到，是不是有這種可能，我的蛋白結(jié)合空白組但是不如我的實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)，并且空白組的結(jié)合蛋白量不能夠被質(zhì)譜檢測(cè)出來(lái)（小于ng），而western實(shí)驗(yàn)太敏感，這樣空白組跟實(shí)驗(yàn)組的蛋白都檢測(cè)出來(lái)了？我用的一抗可能濃度也太高，用了1：100，第一次做防止檢測(cè)不出來(lái)。。。但是一抗的特異性不錯(cuò)，就一條蛋白band。但是非常非常強(qiáng)的信號(hào)。。還有我的上樣量如果很大程度的稀釋?zhuān)梢詼p少非特異結(jié)合么？現(xiàn)在疑問(wèn)就是還有沒(méi)有希望試一下稀釋一抗，稀釋上樣量，然后能至少看出量的區(qū)別呢？我覺(jué)得pg就可以檢測(cè)出來(lái)的話，western很難能分出blank跟實(shí)驗(yàn)組的區(qū)別吧？有點(diǎn)崩潰，特別崩潰！希望大家指點(diǎn)�。。。。�！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有242人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
凌波麗
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
iamvivien(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-09 20:53:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
iamvivien(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-09 20:53:10
| 你在抗體孵育的牛奶或者BSA用量和時(shí)間是否足夠，個(gè)不清洗過(guò)程是不是足夠。因?yàn)榭贵w-抗原相互作用的接觸面積一般是1500-1700平方埃，而一個(gè)氨基酸殘基的表面積是100-200平方埃，所以如果另個(gè)抗原的免疫決定簇正好有6-8個(gè)氨基酸殘基序列相同，存在交叉反應(yīng)的可能是存在的。所以，你可以適當(dāng)稀釋二抗的濃度先試試，不行在稀釋一抗和樣品濃度。 |
2樓2013-05-09 14:21:01
iamvivien
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13
- 帖子: 3
- 在線: 4.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1942857
- 注冊(cè): 2012-08-17
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
|
感謝回復(fù)！我二抗是1：10000的濃度。BSA用的是3% in TTBS, block了過(guò)夜，在四度。一抗是3小時(shí)，室溫，1：100 in 3% BSA, 然后rinse了兩遍后，再用TTBS洗了三遍，每次10分鐘，然后加的二抗，一小時(shí)室溫，1：10000 in TTBS， 最后洗的時(shí)候也是先rinse，再三遍的十分鐘。買(mǎi)的一抗上面說(shuō)是N端的2-33個(gè)氨基酸。有另外一個(gè)蛋白我在空白組的質(zhì)譜上面發(fā)現(xiàn)過(guò)，可能不是特異蛋白，是同一個(gè)family的，序列重合度跟我的目標(biāo)蛋白很高。。。。就是有可能識(shí)別的是另外這個(gè)蛋白？但是這樣的話至少應(yīng)該看到兩條蛋白帶吧？不過(guò)這兩個(gè)蛋白一上一下，大小很接近�？赡芪业牡鞍讕珴�，很粗，完全分不清楚也有可能。。。 二抗您覺(jué)得應(yīng)該稀釋到多少呢？ |
3樓2013-05-09 15:54:12
凌波麗
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
iamvivien: 金幣+4, ★★★很有幫助 2013-05-22 08:08:09
iamvivien: 金幣+4, ★★★很有幫助 2013-05-22 08:08:09
| 我見(jiàn)到實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，一抗和二抗都可以稀釋到1:100-1:15000 |
» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲(chóng)僅提供交流平臺(tái)，不對(duì)該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶(hù)自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識(shí)產(chǎn)權(quán)問(wèn)題，其責(zé)任在于用戶(hù)本人，如對(duì)版權(quán)有異議，請(qǐng)聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : WB_principlesandmethod.pdf
2013-05-09 16:10:23, 10.74 M
4樓2013-05-09 16:03:01
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 iamvivien 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) +3 | 石能偉 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚(yú) 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +7 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 350求調(diào)劑 +5 | weudhdk 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡(jiǎn)木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | lemonzzn 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專(zhuān)利，省、國(guó)級(jí)證書(shū)40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +11 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|