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Francis_zw銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
熒光發(fā)光菌實(shí)驗(yàn)，急急急！
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小弟最近在做熒光發(fā)光菌急性毒理實(shí)驗(yàn)，，碰到一些問(wèn)題。 基本原理：我的菌能表達(dá)一個(gè)蛋白frex，它能與菌內(nèi)的NADH產(chǎn)生binding，然后發(fā)出熒光，文獻(xiàn)中給出的純蛋白的熒光激發(fā)波長(zhǎng)（EX）為498nm，發(fā)射波長(zhǎng)（EM）為518nm，但是我想用的是活菌體做實(shí)驗(yàn)，就遇到了一些問(wèn)題。 1請(qǐng)問(wèn)怎么確定該菌最佳熒光激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)是多少？ 補(bǔ)充：其實(shí)，我已經(jīng)按照一些蟲(chóng)友的意見(jiàn)，全波長(zhǎng)掃描，步驟如下，確定EM=518nm掃EX，或確定EX=498nm掃EM，但結(jié)果卻不能跟純蛋白吻合，我所得的結(jié)果非常奇怪，就是無(wú)論我EX或EM設(shè)定為多少，那么相應(yīng)的最大峰也是該值，例如，EX=500nm掃描，那么EM=500出現(xiàn)最大峰值。 2它是熒光發(fā)光，為fluroscense，而明亮發(fā)光桿菌T3是luminenscence，請(qǐng)問(wèn)二者有和區(qū)別？ 3菌體熒光發(fā)光實(shí)驗(yàn)，有沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，例如我查文獻(xiàn)單位體積內(nèi)，發(fā)光的光子需滿足300萬(wàn)~500萬(wàn)，如何使每次實(shí)驗(yàn)都能控制在此范圍。 4, 如何提高菌體對(duì)毒物的敏感性？ 集思廣益，忘廣大蟲(chóng)友不吝賜教，謝謝大家啦！ |
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2013-05-14 19:26:13, 1.54 M
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Francis_zw
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2013-05-15 20:15:44
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