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[求助]
蛋白純化
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| 近來純化蛋白,深受打擊。將目的基因轉(zhuǎn)入載體pET-21b后,在宿主細胞BL21中進行原核表達。經(jīng)過誘導后收集菌體,超聲波破碎,目的蛋白在上清中有一定的表達量,但沉淀中也存在(我認為超聲破碎不完全)。采用BBI家的Ni-NTA預裝柱進行純化,pH8.0 0-500mM的咪唑溶液進行梯度洗脫,雜蛋白與目的蛋白均在100mM時被洗脫下來,是為什么呢???求助。! |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
銅蟲 (小有名氣)
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