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woerjianbo

木蟲 (小有名氣)

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[求助] MTT實驗吸收波長和吸光值范圍是多少

看了一些文獻，酶標(biāo)儀檢測波長490nm、570nm，有什么區(qū)別，還有說是六百多nm的，到底用哪個？
最終測定的吸光值范圍是多少，有說0-0.7的，還有0.7-1.25，1-2的，到底是哪個線性區(qū)間比較好，或者說在什么條件下選擇不同的吸光范圍？
謝謝

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1樓 2013-05-16 09:23:53

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yyy0305

至尊木蟲 (著名寫手)

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woerjianbo: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-06-01 13:04:51

樓主是用MTT做實驗檢測細(xì)胞活性，一般是讀兩個波長，490nm,570nm;490nm是測信號的，570nm測背景值，最后的數(shù)據(jù)是用OD490-OD570的結(jié)果。
先給樓主介紹一下吸光值的概念，假如儀器給出一個光強為A的特定波長的光，透過檢測液體后，偵測到的該特定波長的光的強度為B，吸光值OD=log(A/B),吸光值為0，A=B代表檢測液體無吸收；吸光值為1，代表A/B=10,儀器發(fā)出的光有90%被檢測液吸收。讀OD的實驗的靈敏度一般都不太好，OD值最大也就3，也就是10的3次方的靈敏度，不如 fluorescence（10七次方）靈敏。
至于吸光值的范圍，這跟細(xì)胞的量有關(guān)，細(xì)胞的量越多，OD值越大，建議樓主做個梯度稀釋實驗，驗證一下細(xì)胞的多少，在哪個范圍內(nèi)OD值處于線性范圍。

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2樓2013-05-31 20:32:24

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