 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3475 | 回復: 15 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
含羞草liu新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
如何去除RNA提取過程中的蛋白質(zhì)污染
|
|
|
大家好！我目前正在構(gòu)建cDNA文庫，需要高質(zhì)量的RNA。提取的材料是楊樹葉片，最先我是用Trizol 提取的，提取到的RNA對OD值檢測，發(fā)現(xiàn)OD260/OD280的范圍在1.8~2.0之間，但電泳檢測時加樣孔總會發(fā)亮，也就是會有蛋白質(zhì)的污染，直接用此法提取的RNA構(gòu)建文庫時總是很不理想。后來，我在takara 購買了RNAiso 試劑配合Fruit-mate試劑進行提�。ㄟ@兩種試劑是針對多糖多酚植物材料的），提取后檢測，OD260/OD280的范圍在1.8~2.0之間，但電泳時加樣孔也會發(fā)亮，此法也不能有效的去除蛋白質(zhì)。之后，我對Trizol提取后的RNA進行LiCL沉淀，配制5M LiCL沉淀液（配制方法為：稱取LiCL 42.4g，Tris 0.4846g，EDTA 0.5846g溶于150ml DEPC處理水中，用5N NaOH 高PH 為7.4，之后DEPC處理水定容到200ml，高壓滅菌），等量加入提取后的RNA中，-80度靜置兩小時，拿出后4度，14000rpm離心20min， 棄上清，可看到半透明狀的沉淀。用預冷的75%乙醇清洗沉淀一次，7500rpm 離心5min，發(fā)現(xiàn)沉淀變成乳白色，加DEPC處理水，發(fā)現(xiàn)此沉淀很難溶解（已室溫靜置約10min，不溶，進行漩渦振蕩，也不溶），隨后，直接用此未完全溶解的RNA提取樣進行檢測，發(fā)現(xiàn)OD260/OD280大于1.8，有的甚至在2.0以上 ，但制膠電泳檢測，加樣孔仍會發(fā)亮，蛋白質(zhì)仍舊沒有除盡。 對于此文庫構(gòu)建，我已進行半年多，仍舊沒有進展，問題總是出現(xiàn)在RNA的提取上。究竟要怎樣才能除盡RNA中的蛋白質(zhì)呢？請高手幫忙，感激不盡�。�！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有243人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 酵母基因組DNA中的RNA怎么去除不掉？
已經(jīng)有10人回復
- RNA提取以及gDNA去除
已經(jīng)有8人回復
- 大腸桿菌RNA提取測得的OD值一直低于1.8
已經(jīng)有9人回復
- 怎么從油脂中去除蛋白質(zhì)？
已經(jīng)有18人回復
- 如何去除質(zhì)粒中的蛋白質(zhì)
已經(jīng)有9人回復
- 請教RNA提取高手：反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經(jīng)有18人回復
- 提取的質(zhì)粒 RNA含量高 如何去除
已經(jīng)有11人回復
- 新手提RNA，請教幾個問題
已經(jīng)有8人回復
- 動植物樣品的采集及DNA樣品的提取(ZT)
已經(jīng)有10人回復
- 提質(zhì)粒時如何去除RNAase
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】DNA提取
已經(jīng)有3人回復
- 去除RNA酶
已經(jīng)有4人回復
- 提取RNA及用DEPC去除RNase的個人總結(jié)(轉(zhuǎn)）
已經(jīng)有19人回復
含羞草liu
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 891.4
- 帖子: 65
- 在線: 26.4小時
- 蟲號: 1418601
- 注冊: 2011-09-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學
5樓2013-05-16 14:04:57
2樓2013-05-16 10:09:21
含羞草liu
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 891.4
- 帖子: 65
- 在線: 26.4小時
- 蟲號: 1418601
- 注冊: 2011-09-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學
3樓2013-05-16 10:33:45
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學
4樓2013-05-16 12:21:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 彼岸t 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070305高分子化學與物理 304分求調(diào)劑 +12 | c297914 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +4 | gysy?s?a 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295材料工程專碩求調(diào)劑 +7 | 1428151015 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +4 | wulanna 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +7 | min3 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 化學308分求調(diào)劑 +8 | 你好明天你好 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料科學與工程 317求調(diào)劑 +4 | JKSOIID 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學調(diào)劑一志愿上海交通大學336分-本科上海211 +4 | 小魚愛有機 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪！？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 各位老師您好：本人初試372分 +5 | jj涌77 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學藥學學碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|