 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3438 | 回復(fù): 15 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
含羞草liu新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
如何去除RNA提取過程中的蛋白質(zhì)污染
|
|
|
大家好！我目前正在構(gòu)建cDNA文庫，需要高質(zhì)量的RNA。提取的材料是楊樹葉片，最先我是用Trizol 提取的，提取到的RNA對(duì)OD值檢測，發(fā)現(xiàn)OD260/OD280的范圍在1.8~2.0之間，但電泳檢測時(shí)加樣孔總會(huì)發(fā)亮，也就是會(huì)有蛋白質(zhì)的污染，直接用此法提取的RNA構(gòu)建文庫時(shí)總是很不理想。后來，我在takara 購買了RNAiso 試劑配合Fruit-mate試劑進(jìn)行提�。ㄟ@兩種試劑是針對(duì)多糖多酚植物材料的），提取后檢測，OD260/OD280的范圍在1.8~2.0之間，但電泳時(shí)加樣孔也會(huì)發(fā)亮，此法也不能有效的去除蛋白質(zhì)。之后，我對(duì)Trizol提取后的RNA進(jìn)行LiCL沉淀，配制5M LiCL沉淀液（配制方法為：稱取LiCL 42.4g，Tris 0.4846g，EDTA 0.5846g溶于150ml DEPC處理水中，用5N NaOH 高PH 為7.4，之后DEPC處理水定容到200ml，高壓滅菌），等量加入提取后的RNA中，-80度靜置兩小時(shí)，拿出后4度，14000rpm離心20min， 棄上清，可看到半透明狀的沉淀。用預(yù)冷的75%乙醇清洗沉淀一次，7500rpm 離心5min，發(fā)現(xiàn)沉淀變成乳白色，加DEPC處理水，發(fā)現(xiàn)此沉淀很難溶解（已室溫靜置約10min，不溶，進(jìn)行漩渦振蕩，也不溶），隨后，直接用此未完全溶解的RNA提取樣進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)OD260/OD280大于1.8，有的甚至在2.0以上 ，但制膠電泳檢測，加樣孔仍會(huì)發(fā)亮，蛋白質(zhì)仍舊沒有除盡。 對(duì)于此文庫構(gòu)建，我已進(jìn)行半年多，仍舊沒有進(jìn)展，問題總是出現(xiàn)在RNA的提取上。究竟要怎樣才能除盡RNA中的蛋白質(zhì)呢？請(qǐng)高手幫忙，感激不盡�。�！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有127人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 酵母基因組DNA中的RNA怎么去除不掉？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- RNA提取以及gDNA去除
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 大腸桿菌RNA提取測得的OD值一直低于1.8
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 怎么從油脂中去除蛋白質(zhì)？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 如何去除質(zhì)粒中的蛋白質(zhì)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 請(qǐng)教RNA提取高手：反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 提取的質(zhì)粒 RNA含量高 如何去除
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 新手提RNA，請(qǐng)教幾個(gè)問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 動(dòng)植物樣品的采集及DNA樣品的提取(ZT)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 提質(zhì)粒時(shí)如何去除RNAase
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA提取
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 去除RNA酶
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 提取RNA及用DEPC去除RNase的個(gè)人總結(jié)(轉(zhuǎn)）
已經(jīng)有19人回復(fù)
9樓2013-07-10 17:03:03
2樓2013-05-16 10:09:21
含羞草liu
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 891.4
- 帖子: 65
- 在線: 26.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1418601
- 注冊(cè): 2011-09-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲學(xué)
3樓2013-05-16 10:33:45
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2013-05-16 12:21:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +4 | 冬十三 2026-03-18 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+4
|
.6lL 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求各位老師收留 +9 | 秋有木北 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢(mèng)人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | pupcoco 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
機(jī)械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學(xué)上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請(qǐng)求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|