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yxingying銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教植物遺傳轉(zhuǎn)化中關(guān)于農(nóng)桿菌的活力
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| 請問各位朋友,大家在做植物遺傳轉(zhuǎn)化采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)下胚軸時,如果所需菌液濃度為OD=0.8-1.0,是一搖到這個濃度,還是一搖24小時,再吸取一定量菌液二搖到所需濃度?哪種方法菌活力高一些,更有利于轉(zhuǎn)化? |
木蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
| 植物遺傳轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的活力是比較重要的一點。一般共有幾個OD濃度需要考慮。一搖OD不是太關(guān)鍵,一般轉(zhuǎn)化前幾天重新活化到平板,培養(yǎng)48h,再挑取單克隆24h即可。二搖(應(yīng)該叫活化),直接按5%取菌液活化到新的液體培養(yǎng)基,至OD0.6~0.8就好。一般5h的培養(yǎng)就能滿足要求。這一步?jīng)Q定了菌體的活力,讓收集菌體中的活菌的比例較高。然后是侵染液,一般用將活化好的菌體收集后,按體積換算重懸到轉(zhuǎn)化所需的液體共培養(yǎng)基中就行,一般OD0.6~1.0都有選擇,這個可以自己摸索一下。如果還需要提高轉(zhuǎn)化效率,可以考慮加乙酰丁香酮,一般100~200mg/L。 |
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