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小小佐羅2木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
做過(guò)細(xì)菌表面疏水性和自凝集試驗(yàn)的大神給點(diǎn)指導(dǎo) 已有2人參與
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本人正在做一些益生菌菌株的表面疏水性和自凝集試驗(yàn)，本以為比較簡(jiǎn)單，但是做出來(lái)結(jié)果明顯不對(duì)，我把我做的步驟寫(xiě)下來(lái)，大家給指導(dǎo)下到底哪里出了問(wèn)題。 表面疏水性：1、將過(guò)夜培養(yǎng)菌液12000rpm離心5分鐘，然后用生理鹽水洗2次，每次加5ml生理鹽水； 2、洗好的菌用生理鹽水調(diào)到OD600 大約0.6左右； 3、取3ml調(diào)好OD的菌液+0.6ml二甲苯，渦旋儀震蕩90s，然后放置15min； 4、用槍將上層二甲苯全部吸走，然后測(cè)下層水相的OD600值。 但是每次測(cè)后面水相的OD值都比之前沒(méi)加二甲苯的還要大，而且上層二甲苯明顯也沒(méi)看到菌融到里面去，看了很多文獻(xiàn)都會(huì)測(cè)出一個(gè)值，我這樣算出來(lái)就是負(fù)值了，做了很多菌（40株左右了），結(jié)果都是后面比前面大，看的文獻(xiàn)里面人家都能測(cè)出有表面疏水性只是大小的問(wèn)題。不知道問(wèn)題出在那里了，請(qǐng)大神指導(dǎo)下。 自凝集試驗(yàn)：1、將過(guò)夜培養(yǎng)菌液12000rpm離心5分鐘，然后用生理鹽水洗2次，每次加5ml生理鹽水； 2、洗好的菌用生理鹽水調(diào)到OD600 大約0.25左右； 3、室溫放置20h； 4、文獻(xiàn)上說(shuō)這時(shí)候測(cè)定菌液的OD，這塊我就搞不明白了，放置20h后就會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象，這時(shí)候到底吸那一部分來(lái)測(cè)OD那？ 這2個(gè)問(wèn)題糾結(jié)了很久，希望各位能給與指點(diǎn)，謝謝！ |
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