 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 494 | 回復: 2 | ||
harbingeryg金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
關(guān)于用OPC柱純化長鏈脂酰輔酶A的操作，以及高胰島素-正葡萄糖鉗夾問題
|
|
文獻：Mechanism by Which Fatty Acids Inhibit Insulin Activation of Insulin Receptor Substrate-1 (IRS-1)-associated Phosphatidylinositol 3-Kinase Activity in Muscle 描述如下：LCACoAs were extracted from frozen tissue samples (100 mg) and purified using a solid phase extraction method described previously by Deutsch et al. (15) with minor modifications for desalting. A known amount of heptadecanoyl-CoA was added as an internal standard. OPC columns (Applied Biosystems, Foster City, CA) were used for solid phase extraction. Samples were dissolved in 100 l of methanol/H2O for LC/MS/MS analysis. 查了參考文獻，翻譯出來是這樣的： 100mg 組織樣品置于2 mL 100mM 磷酸二氫鉀溶液中（PH=4.9），勻漿20 s，加入2 mL異丙醇，繼續(xù)勻漿20 s，加入0.25 mL 飽和硫酸銨，4 mL 乙腈，渦旋5min，5min 1900g 離心，取上清，用10 mL 100mM 磷酸二氫鉀溶液（PH=4.9）稀釋。 Applied Biosystem Oligonucleotide purification cartridge (OPC). 乙腈5 mL沖洗，輕微過空氣，25mM 磷酸二氫鉀 5 mL，輕微過空氣。聚丙烯注射針注入樣品約15 mL， 25mM 磷酸二氫鉀 5 mL 沖洗，抽干，兩次。60%乙腈-100mM磷酸二氫鉀0.3 mL,緩慢洗脫。后0.25mL為目標洗脫物。十七酰輔酶A作為內(nèi)標。 脫鹽處理。樣品溶于100 uL 甲醇/水。 本人藥物分析專業(yè)，只用過ODS固相小柱，沒用過OPC柱，據(jù)說是純化核酸的。 想請教的問題是： 1. OPC柱似乎也有類似的“活化”過程，但是為什么要輕微通過空氣？ODS柱是要避免過空氣抽干的。 2. 參考文獻中由于是一般的液相方法，現(xiàn)在要進質(zhì)譜所以要脫鹽。文獻中的minor modifications for desalting, 這個脫鹽是要怎么弄？具體是在原方法基礎(chǔ)上增加或者修改了什么步驟？求做過核酸和脂質(zhì)純化的前輩解答。 3. 額外問題一個，高胰島素-正葡萄糖鉗夾操作中，如何控制葡萄糖輸入量，以維持血糖在正常范圍？ |
回復此樓» 猜你喜歡
288求調(diào)劑 一志愿哈工大 材料與化工
已經(jīng)有31人回復
-
一志愿北京科技大學085601材料工程英一數(shù)二初試總分335求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
085801 總分275 本科新能源 求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復
-
324求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
學碩化學工程與技術(shù)，一志愿中國海洋大學320+求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
初試301，代碼085701環(huán)境工程，本碩一致，四六級已過，有二區(qū)一作，共發(fā)表5篇論文
已經(jīng)有6人回復
-
化學308分調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復
-
346求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
環(huán)境285分，過六級，求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
harbingeryg
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 836.5
- 帖子: 123
- 在線: 37.7小時
- 蟲號: 1360414
- 注冊: 2011-08-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 色譜分析
2樓2013-05-22 00:04:38
harbingeryg
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 836.5
- 帖子: 123
- 在線: 37.7小時
- 蟲號: 1360414
- 注冊: 2011-08-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 色譜分析
3樓2013-06-04 20:00:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 harbingeryg 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601一志愿中山大學深圳材料工程330求調(diào)劑 +8 | pipiver 2026-03-30 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 272求調(diào)劑，接受跨專業(yè)調(diào)劑！ +4 | 閑魚盧 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07生物學求調(diào)劑 一志愿同濟大學359分 +3 | LAMC. 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +9 | Gs大王 2026-04-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +8 | 呢呢妮妮 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 086502化學工程342求調(diào)劑 +7 | 阿姨復古不過 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿南師大334求調(diào)劑 +4 | seven7yu 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +12 | liziyeyeye 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +3 | 321* 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料科學與工程求調(diào)劑 +13 | 深V宿舍吧 2026-03-29 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 英一數(shù)一總分334求調(diào)劑 +4 | 陳陽坤 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +6 | 賣個關(guān)子吧 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[有機交流] 考研調(diào)劑 +8 | watb 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 藥學105500求調(diào)劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|