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harbingeryg金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于用OPC柱純化長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A的操作，以及高胰島素-正葡萄糖鉗夾問題
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文獻(xiàn)：Mechanism by Which Fatty Acids Inhibit Insulin Activation of Insulin Receptor Substrate-1 (IRS-1)-associated Phosphatidylinositol 3-Kinase Activity in Muscle 描述如下：LCACoAs were extracted from frozen tissue samples (100 mg) and purified using a solid phase extraction method described previously by Deutsch et al. (15) with minor modifications for desalting. A known amount of heptadecanoyl-CoA was added as an internal standard. OPC columns (Applied Biosystems, Foster City, CA) were used for solid phase extraction. Samples were dissolved in 100 l of methanol/H2O for LC/MS/MS analysis. 查了參考文獻(xiàn)，翻譯出來是這樣的： 100mg 組織樣品置于2 mL 100mM 磷酸二氫鉀溶液中（PH=4.9），勻漿20 s，加入2 mL異丙醇，繼續(xù)勻漿20 s，加入0.25 mL 飽和硫酸銨，4 mL 乙腈，渦旋5min，5min 1900g 離心，取上清，用10 mL 100mM 磷酸二氫鉀溶液（PH=4.9）稀釋。 Applied Biosystem Oligonucleotide purification cartridge (OPC). 乙腈5 mL沖洗，輕微過空氣，25mM 磷酸二氫鉀 5 mL，輕微過空氣。聚丙烯注射針注入樣品約15 mL， 25mM 磷酸二氫鉀 5 mL 沖洗，抽干，兩次。60%乙腈-100mM磷酸二氫鉀0.3 mL,緩慢洗脫。后0.25mL為目標(biāo)洗脫物。十七酰輔酶A作為內(nèi)標(biāo)。 脫鹽處理。樣品溶于100 uL 甲醇/水。 本人藥物分析專業(yè)，只用過ODS固相小柱，沒用過OPC柱，據(jù)說是純化核酸的。 想請(qǐng)教的問題是： 1. OPC柱似乎也有類似的“活化”過程，但是為什么要輕微通過空氣？ODS柱是要避免過空氣抽干的。 2. 參考文獻(xiàn)中由于是一般的液相方法，現(xiàn)在要進(jìn)質(zhì)譜所以要脫鹽。文獻(xiàn)中的minor modifications for desalting, 這個(gè)脫鹽是要怎么弄？具體是在原方法基礎(chǔ)上增加或者修改了什么步驟？求做過核酸和脂質(zhì)純化的前輩解答。 3. 額外問題一個(gè)，高胰島素-正葡萄糖鉗夾操作中，如何控制葡萄糖輸入量，以維持血糖在正常范圍？ |
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3樓2013-06-04 20:00:07
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2樓2013-05-22 00:04:38
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