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如圖，我的marker最后一條帶很丑，蛋白條帶很虛，很淡不清楚，我的電壓80V一個(gè)小時(shí)，120一個(gè)半小時(shí) 我是在冰上跑的，蛋白大概17kd .我的buffer 是新的，應(yīng)該不是樣品的問(wèn)題，以前也跑過(guò)沒(méi)有，沒(méi)有這種情況。我的分離膠15%

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[ Last edited by 朱青青1988 on 2013-5-24 at 21:21 ]

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1樓 2013-05-24 21:15:02

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mitocam

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沒(méi)有問(wèn)題，我的MWM經(jīng)常都是這樣。

我發(fā)現(xiàn)有時(shí)候新鮮的樣品的帶很sharp，放了幾天就虛了，加入DTT后有好轉(zhuǎn)，可能蛋白質(zhì)氧化了。不過(guò)一般不介意這些小變化。

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2樓2013-05-25 08:28:30

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cicelyzh

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疏水性強(qiáng)的蛋白的帶往往不是很sharp。你的目的蛋白是膜蛋白嗎？

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3樓2013-05-25 09:12:58

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濃縮膠太少了，想要好看，配膠的時(shí)候濃縮膠多鋪點(diǎn)，增加樣品在濃縮膠中跑的距離，這樣就可以壓平了

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4樓2013-05-25 11:09:29

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3樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-25 09:12:58
疏水性強(qiáng)的蛋白的帶往往不是很sharp。你的目的蛋白是膜蛋白嗎？

不是膜蛋白，但是我的mrker 也很拖啊

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5樓2013-05-25 13:00:17

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2樓: Originally posted by mitocam at 2013-05-25 08:28:30
沒(méi)有問(wèn)題，我的MWM經(jīng)常都是這樣。

我發(fā)現(xiàn)有時(shí)候新鮮的樣品的帶很sharp，放了幾天就虛了，加入DTT后有好轉(zhuǎn)，可能蛋白質(zhì)氧化了。不過(guò)一般不介意這些小變化。

可是MRKER也很拖尾啊，是不是還是膠的問(wèn)題

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6樓2013-05-25 13:01:16

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可是MRKER也很拖尾啊，是不是還是膠的問(wèn)題

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7樓2013-05-25 13:01:24

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我跑的marker有時(shí)也是上面打的還挺好，到后面幾個(gè)就有點(diǎn)虛了。試試減少marker的量。

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8樓2013-05-25 17:02:55

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引用回帖:

7樓: Originally posted by 朱青青1988 at 2013-05-25 13:01:24
可是MRKER也很拖尾啊，是不是還是膠的問(wèn)題...

應(yīng)該不是膠的問(wèn)題，因?yàn)槠渌鼛н€是很sharp的，只有小分子量的蛋白質(zhì)帶變虛，因?yàn)樾〉鞍踪|(zhì)受氧化或其它修飾，更容易引起遷移率的變化。

在樣品和marker中加些DTT試試。

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9樓2013-05-25 18:31:40

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5樓: Originally posted by 朱青青1988 at 2013-05-25 13:00:17
不是膜蛋白，但是我的mrker 也很拖啊...

小分子量區(qū)條帶有些虛還算是正常吧�？赡苁巧蠘觔uffer中的還原劑量不足或者是分離膠的tris緩沖液的pH不十分準(zhǔn)確。

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10樓2013-05-26 01:42:16

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