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lynic新蟲(chóng) (初入文壇)
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SDS-PAGE出現(xiàn)奇怪的拖尾
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本科時(shí)候跑了一年的E.coli，從來(lái)沒(méi)出現(xiàn)這種情況： 用Pre-cast的膠，前兩次跑過(guò)沒(méi)問(wèn)題，條帶清晰蛋白分離很好；電泳緩沖液也是公司的，自己稀釋?zhuān)彩菦](méi)問(wèn)題的。電壓一直是200V。跑的是全菌，不誘導(dǎo)表達(dá)的那種 現(xiàn)象：同一片膠Marker和另一種菌沒(méi)有拖尾，但是E.coli拖尾嚴(yán)重，跑的時(shí)候就看到了，染色后一片模糊。E.coli的樣品是新制的，小試管2ml培養(yǎng)7小時(shí)，樣品處理方式不變，收菌后dI WATER洗兩次，加loading buffer煮5分鐘，上樣量不大（按之前的經(jīng)驗(yàn)值，上兩次跑出的條帶清晰分明）。 跑完以后想會(huì)不會(huì)是雜菌污染之類(lèi)的問(wèn)題，或者搖菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（36C，200rpm），重新挑單菌落接種，4小時(shí)培養(yǎng)。煮菌后不到5分鐘就上樣了依然拖尾，Marker和另一種菌則沒(méi)有拖尾��！第二次跑膠時(shí)候看到上樣孔那有殘留物，但我確定用移液槍吸取樣品時(shí)候沒(méi)有粘稠狀的東西~ 求助各位，是不是DNA降解呢？但是之前相同條件，跑E.coli全菌，一直沒(méi)有這種情況發(fā)生，即使是反復(fù)凍融的樣品或者過(guò)夜培養(yǎng)，都沒(méi)出現(xiàn)類(lèi)似問(wèn)題。請(qǐng)問(wèn)出現(xiàn)了什么問(wèn)題我忽略了的，應(yīng)該怎么解決呢？ [ Last edited by 1949stone on 2011-9-29 at 11:39 ] |
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