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SDS-PAGE出現(xiàn)奇怪的拖尾
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本科時候跑了一年的E.coli，從來沒出現(xiàn)這種情況： 用Pre-cast的膠，前兩次跑過沒問題，條帶清晰蛋白分離很好；電泳緩沖液也是公司的，自己稀釋，也是沒問題的。電壓一直是200V。跑的是全菌，不誘導表達的那種 現(xiàn)象：同一片膠Marker和另一種菌沒有拖尾，但是E.coli拖尾嚴重，跑的時候就看到了，染色后一片模糊。E.coli的樣品是新制的，小試管2ml培養(yǎng)7小時，樣品處理方式不變，收菌后dI WATER洗兩次，加loading buffer煮5分鐘，上樣量不大（按之前的經(jīng)驗值，上兩次跑出的條帶清晰分明）。 跑完以后想會不會是雜菌污染之類的問題，或者搖菌時間過長（36C，200rpm），重新挑單菌落接種，4小時培養(yǎng)。煮菌后不到5分鐘就上樣了依然拖尾，Marker和另一種菌則沒有拖尾！！第二次跑膠時候看到上樣孔那有殘留物，但我確定用移液槍吸取樣品時候沒有粘稠狀的東西~ 求助各位，是不是DNA降解呢？但是之前相同條件，跑E.coli全菌，一直沒有這種情況發(fā)生，即使是反復凍融的樣品或者過夜培養(yǎng)，都沒出現(xiàn)類似問題。請問出現(xiàn)了什么問題我忽略了的，應(yīng)該怎么解決呢？ [ Last edited by 1949stone on 2011-9-29 at 11:39 ] |
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