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wpwrn銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
融合PCR
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兩個(gè)片段進(jìn)行融合，一個(gè)不到200.一個(gè)2000多，怎么都容不上去？怎么辦？ 我的做法  CR產(chǎn)物各1ul,退火程序?yàn)椤 ?4℃ 5min變性，進(jìn)入PCR循環(huán)：94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 2min30s，10個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃ 5min。然后加引物 實(shí)在是容不出來(lái)，求助，救命啊 |
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bullfrog325
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-29 02:00:31
gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 02:00:33
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-29 02:00:33
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在樓上的建議的基礎(chǔ)上: 檢查融合前的PCR程序, 確認(rèn)用的是不在末端加A的聚合酶 檢查預(yù)計(jì)融合的地方, 兩個(gè)片段重疊是不是足夠長(zhǎng), 否則要把退火溫度降下來(lái) 檢查引物(最遠(yuǎn)端的兩個(gè))是不是加了 |
wpwrn3樓2013-05-28 22:57:57
克隆大蝦
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2樓2013-05-28 21:52:20
wpwrn
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4樓2013-05-29 09:45:48
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5樓2013-05-29 09:58:42
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