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once1015木蟲 (正式寫手)
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[求助]
酶的米氏常數(shù) 和 解離常數(shù)
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我是做結構生物學的,是微生物領域的小菜,現(xiàn)在得到一個比較有意思的酶的結構。 現(xiàn)在需要補充功能性實驗。 但是因為 反應速度太快, 用雙倒數(shù)法做圖獲得的Km值 都很不穩(wěn)定。 現(xiàn)在剛好有ITC的設備, 想測量一下酶與底物的解離常數(shù) Kd, 然后用這個數(shù)據(jù) 顯示 酶與底物的親和力如何, 可以嗎? 謝謝您的幫助! |
酶工程 |
新蟲 (小有名氣)
至尊木蟲 (文壇精英)
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不穩(wěn)定,,,,,給個提示 酶促反應速度只在最初一段時間內(nèi)保持恒定,隨著反應時間的延長,酶促反應速度逐漸下降。原因有多種,如底物濃度降低,產(chǎn)物濃度增加而對酶產(chǎn)生抑制作用并加速逆反應的進行,酶在一定pH及溫度下部分失活等。因此,研究酶的活力以酶促反應的初速度為準。 為獲得準確的實驗結果,應盡量減少實驗操作中帶來的誤差。因此配制各種底物溶液時應用同一母液進行稀釋,保證底物濃度的準確性。各種試劑的加量也應準確,并嚴格控制準確的酶促反應時間。 |
木蟲 (正式寫手)
至尊木蟲 (文壇精英)
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