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once1015木蟲 (正式寫手)
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[求助]
酶的米氏常數(shù) 和 解離常數(shù)
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我是做結(jié)構(gòu)生物學(xué)的，是微生物領(lǐng)域的小菜，現(xiàn)在得到一個比較有意思的酶的結(jié)構(gòu)。 現(xiàn)在需要補(bǔ)充功能性實(shí)驗(yàn)。 但是因?yàn)?反應(yīng)速度太快， 用雙倒數(shù)法做圖獲得的Km值 都很不穩(wěn)定。 現(xiàn)在剛好有ITC的設(shè)備， 想測量一下酶與底物的解離常數(shù) Kd， 然后用這個數(shù)據(jù) 顯示 酶與底物的親和力如何， 可以嗎？ 謝謝您的幫助！ |
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不穩(wěn)定，，，，，給個提示 酶促反應(yīng)速度只在最初一段時間內(nèi)保持恒定，隨著反應(yīng)時間的延長，酶促反應(yīng)速度逐漸下降。原因有多種，如底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加而對酶產(chǎn)生抑制作用并加速逆反應(yīng)的進(jìn)行，酶在一定pH及溫度下部分失活等。因此，研究酶的活力以酶促反應(yīng)的初速度為準(zhǔn)。 為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)盡量減少實(shí)驗(yàn)操作中帶來的誤差。因此配制各種底物溶液時應(yīng)用同一母液進(jìn)行稀釋，保證底物濃度的準(zhǔn)確性。各種試劑的加量也應(yīng)準(zhǔn)確，并嚴(yán)格控制準(zhǔn)確的酶促反應(yīng)時間。 |
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