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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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louisa俊

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[求助] 兩次qPCR結(jié)果相差太大。。。。U6 Ct值應(yīng)該是多少

最近做了2次qPCR,結(jié)果相差太大。。。用的內(nèi)參是U6，發(fā)現(xiàn)U6的數(shù)值相差太大，想請教一下U6 的Ct值究竟是多少？為什么兩次實(shí)驗(yàn)U6的Ct值會(huì)相差那么多？？還有就是引物能用DEPC水稀釋嗎？？對(duì)引物有沒有影響？？謝謝

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1樓 2013-06-04 21:47:44

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chenguestc

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louisa俊(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-06-05 11:42:26

CT值依據(jù)加入模板量，如果相差太大應(yīng)該是操作的問題，最大的可能是加入模板的量不太一致，即加模板時(shí)槍頭里沒打干凈。引物可以用滅菌水直接稀釋。

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2樓2013-06-05 07:56:58

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froess

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louisa俊(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-06-05 11:42:34

首先你提出的問題有些不嚴(yán)謹(jǐn)，其實(shí)對(duì)于種屬之間U6的表達(dá)量是有差異的。建議保證實(shí)驗(yàn)條件相同。如果你保證前后實(shí)驗(yàn)條件相同，那我覺得有個(gè)很嚴(yán)重的問題，U6在你做的實(shí)驗(yàn)中表達(dá)不穩(wěn)定，所以導(dǎo)致相差太大。

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3樓2013-06-05 10:37:49

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songzuowei

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1949stone: 金幣+2, 鼓勵(lì) 2013-06-09 14:12:06

可以用來做內(nèi)參的基因很多，到底用哪個(gè)基因做內(nèi)參需要看你的模板來源，有一個(gè)專門的內(nèi)參選擇軟件，但可以用來做內(nèi)參的一般是表達(dá)量高且表達(dá)水平比較恒定的基因，你這個(gè)U6不知道符不符合條件，另外引物直接用滅菌水稀釋，一點(diǎn)影響都沒有

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4樓2013-06-05 15:25:32

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2樓: Originally posted by chenguestc at 2013-06-05 07:56:58
CT值依據(jù)加入模板量，如果相差太大應(yīng)該是操作的問題，最大的可能是加入模板的量不太一致，即加模板時(shí)槍頭里沒打干凈。引物可以用滅菌水直接稀釋。

恩。非常感謝。下次加樣的時(shí)候，我會(huì)盡量保持一致，謝謝�。�

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5樓2013-06-06 09:00:28

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4樓: Originally posted by songzuowei at 2013-06-05 15:25:32
可以用來做內(nèi)參的基因很多，到底用哪個(gè)基因做內(nèi)參需要看你的模板來源，有一個(gè)專門的內(nèi)參選擇軟件，但可以用來做內(nèi)參的一般是表達(dá)量高且表達(dá)水平比較恒定的基因，你這個(gè)U6不知道符不符合條件，另外引物直接用滅菌水稀 ...

我們做的基因一直是用U6做內(nèi)參的，qPCR的結(jié)果，有兩個(gè)U6值是17點(diǎn)幾。還有一個(gè)突然變成20幾了，我覺得這樣的結(jié)果是不正常的

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6樓2013-06-06 09:02:02

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3樓: Originally posted by froess at 2013-06-05 10:37:49
首先你提出的問題有些不嚴(yán)謹(jǐn)，其實(shí)對(duì)于種屬之間U6的表達(dá)量是有差異的。建議保證實(shí)驗(yàn)條件相同。如果你保證前后實(shí)驗(yàn)條件相同，那我覺得有個(gè)很嚴(yán)重的問題，U6在你做的實(shí)驗(yàn)中表達(dá)不穩(wěn)定，所以導(dǎo)致相差太大。

U6表達(dá)不穩(wěn)定？？？？？U6是內(nèi)參，一般來說，都是穩(wěn)定表達(dá)的啊

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7樓2013-06-06 09:02:52

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froess

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7樓: Originally posted by louisa俊 at 2013-06-06 09:02:52
U6表達(dá)不穩(wěn)定？？？？？U6是內(nèi)參，一般來說，都是穩(wěn)定表達(dá)的啊...

U6是內(nèi)參沒錯(cuò)，但在某些組織里，它也并非穩(wěn)定表達(dá)。只是提出疑問，你可以再找找文獻(xiàn)哈

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8樓2013-06-09 12:38:08

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8樓: Originally posted by froess at 2013-06-09 12:38:08
U6是內(nèi)參沒錯(cuò)，但在某些組織里，它也并非穩(wěn)定表達(dá)。只是提出疑問，你可以再找找文獻(xiàn)哈...

好的，謝謝哈

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9樓2013-06-09 15:27:44

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