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1樓 2013-06-11 21:17:40

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5樓: Originally posted by shucanwei at 2013-06-18 00:29:27
建議你把大體的實(shí)驗(yàn)步驟說(shuō)一說(shuō)，
膠的濃度，顯影步驟等......

沒有銀染，引物是加過(guò)熒光標(biāo)記的，直接在Li-cor 4300遺傳分析儀上跑膠，在跑的過(guò)程中條帶直接在程序中展現(xiàn)。這個(gè)膠是8%聚的丙酰胺變性膠

6樓2013-06-18 07:45:01

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7樓: Originally posted by shucanwei at 2013-06-19 00:31:37
高級(jí)啊......
我還是用銀染啊......
但是我看你這個(gè)條帶怎么那么少�。�
你的DNA是用那個(gè)完整性好的嗎？
請(qǐng)你把預(yù)擴(kuò)增的產(chǎn)物的電泳圖和選擴(kuò)的瓊脂糖電泳圖都上來(lái)看一下吧......
懷疑是模板問(wèn)題啊，怎么這么少帶 ...

這個(gè)是我跑的瓊脂糖，第一個(gè)是10000的marker，第二個(gè)是我的基因組DNA,第三個(gè)是連接產(chǎn)物，第四個(gè)是稀釋10倍的連接產(chǎn)物，第五個(gè)是預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物，我的選擴(kuò)產(chǎn)物都直接加試劑盒中的stop buffer了所以不能用來(lái)跑瓊脂糖了.t因?yàn)槲尹c(diǎn)樣的時(shí)候加的產(chǎn)物有點(diǎn)少，所以條帶都挺淡的，你只能湊合著看了

1.jpg

8樓2013-06-19 21:49:21

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10樓: Originally posted by shucanwei at 2013-06-20 00:32:54
想傳一張預(yù)擴(kuò)增的圖片給你看看，但是上傳不了啊

這個(gè)就是我用人家試劑盒里預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物稀釋40倍后做選擴(kuò)跑出來(lái)的圖。這么一看，我的模板跑出來(lái)的圖真的是差太遠(yuǎn)了，哎，看來(lái)還得看看DNA質(zhì)量和雙酶切體系了。但是雙酶切產(chǎn)物跑出那個(gè)樣子會(huì)是什么原因呢？

1.jpg

12樓2013-06-21 17:03:54

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接頭是試劑盒里的。那我再用新提取的DNA試一下吧，謝謝啦~

14樓2013-06-22 08:50:35

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圖片看不清，上原圖吧

唯以一人治天下，不以天下奉一人。

2樓2013-06-16 15:29:29

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2樓: Originally posted by shucanwei at 2013-06-16 15:29:29
圖片看不清，上原圖吧

這次傳了兩張，你看看清楚不。這兩個(gè)是同一批選擴(kuò)產(chǎn)物，只是一個(gè)是第一天跑的膠，一個(gè)是第三天跑的

1.jpg

2.jpg

3樓2013-06-17 12:48:00

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你是銀染嗎？怎么黑白那樣子的？
而且條帶數(shù)不多啊......

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4樓2013-06-18 00:28:26

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你這個(gè)圖片我看起來(lái)有點(diǎn)問(wèn)題，主要是你的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物一般不會(huì)彌散得那么大的啊，我要2%瓊脂糖跑的時(shí)候，挺亮的啊，5ul上樣。
你的基因組質(zhì)量一般吧，但是濃度，OD值好的話，酶切也是沒有問(wèn)題的。
連接產(chǎn)物一般是電泳看不到的。
你的預(yù)擴(kuò)增感覺不對(duì).......太淡了.....應(yīng)該是比較濃的。
連接產(chǎn)物取多少去跑預(yù)擴(kuò)增啊？

唯以一人治天下，不以天下奉一人。

9樓2013-06-20 00:25:18

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