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[求助]
甲基化思路
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想請(qǐng)教各位做甲基化的大俠 大家做甲基化都是什么思路啊？ 我知道這問(wèn)題有點(diǎn)大 但是偶想聽聽各種思路 基于高通量測(cè)序的甲基化是什么思路 分子實(shí)驗(yàn)的甲基化是什么思路     |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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5樓2013-06-17 11:14:11
2樓2013-06-16 11:09:48
凌波麗
專家顧問(wèn) (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流，請(qǐng)問(wèn)你是做表觀遺傳學(xué)的嗎？ 2013-06-16 16:01:43
myprayer: 金幣+2, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 08:16:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流，請(qǐng)問(wèn)你是做表觀遺傳學(xué)的嗎？ 2013-06-16 16:01:43
myprayer: 金幣+2, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 08:16:20
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DNA甲基化的高通量測(cè)序的基本方法可以分為兩大類： 1.非質(zhì)譜方法：比如重亞硫酸鹽測(cè)序方法檢測(cè)DNAde甲基化；甲基化-敏感性單鏈構(gòu)想分析；DNA的甲基化改變的變性梯度膠電泳；DNA的甲基化特異性寡核苷酸生物芯片分析，生物芯片分析也能夠用于DNA測(cè)序等等。 2.質(zhì)譜方法：測(cè)定DNA甲基化修飾之后的相對(duì)分子量變化，MS-MS既可以用測(cè)定多肽序列，也可以用于測(cè)定寡核苷酸序列，可以在測(cè)定甲基化特異性寡核苷酸序列前用限制性內(nèi)切酶切開DNA，不含有修飾的DNA部分可直接用酶法和化學(xué)法測(cè)定，剩下的有修飾的部分DNA片段用MS-MS。 參考文獻(xiàn)： 1.MMB 507-DNA methylation,which is one of Methods in Molecular Biology Series.http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6015850 2.John N. Abelson Melvin I. Simon ect .,Method in Enzymology Vol-402,Biological Mass Spectrometry,Elsevier Inc,2005. http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5795342 專門講核酸的質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的書現(xiàn)在不在我手里。抱歉！ |
3樓2013-06-16 14:28:21
4樓2013-06-17 11:13:13
凌波麗
專家顧問(wèn) (知名作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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DNA甲基化的測(cè)序的研究是現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)表觀遺傳學(xué)研究中的DNA甲基化的結(jié)構(gòu)和功能影響的第一步，或者說(shuō)起點(diǎn)，沒(méi)有這一步，DNA甲基化（本身就是生命科學(xué)的研究最前沿之一）的生物效應(yīng)只是空中樓閣。DNA甲基化不被認(rèn)為是DNA的堿基序列發(fā)生了改變，即遺傳物質(zhì)未變生物體的表達(dá)性狀卻改變了。 高通量DNA的甲基化測(cè)序研究本身也是高通量DNA測(cè)序的一個(gè)重大進(jìn)展。DNA的核苷和堿基的修飾種類很多，這些修飾成分都不能用常規(guī)的酶法和化學(xué)法測(cè)定。 最好的高通量DNA的修飾成分的測(cè)序是質(zhì)譜方法：測(cè)定DNA甲基化修飾之后的相對(duì)分子量變化，MS-MS既可以用測(cè)定多肽序列，也可以用于測(cè)定寡核苷酸序列，可以在測(cè)定甲基化特異性寡核苷酸序列前用限制性內(nèi)切酶切開DNA，不含有修飾的DNA部分可直接用酶法和化學(xué)法測(cè)定，剩下的有修飾的部分DNA片段用MS-MS。目前是需要很大的發(fā)展。 |
6樓2013-06-17 11:28:27
7樓2013-06-17 13:45:19
8樓2013-06-17 13:45:58
9樓2013-06-17 15:48:16
10樓2013-06-17 20:31:03
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