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waterworld木蟲 (正式寫手)
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[求助]
只知道基因CDS區(qū)序列，如何擴(kuò)增該基因的啟動(dòng)子
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如題，我想克隆山羊一個(gè)基因的啟動(dòng)子，CDS區(qū)已經(jīng)由本實(shí)驗(yàn)室另外的師妹克隆出來(lái)，本來(lái)想克隆5‘RACE之后找到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，再克隆啟動(dòng)子的，但是最近發(fā)現(xiàn)5'RACE試劑盒用完啦，那個(gè)試劑盒比較貴，再買一個(gè)的可能性不是很大。所以目前在這種情況下如何克隆該基因的啟動(dòng)子。 還有，山羊和牛的相似性很高，可以參考牛的基因組序列，查到NCBI中有牛的mRNA序列，但是只有部分5’RACE序列，不到100bp的樣子。。。因?yàn)槟壳吧窖虻幕蚪M還沒有公布，我們克隆山羊的啟動(dòng)子一般都是根據(jù)牛的基因組序列設(shè)計(jì)，不知道在有這些信息的情況下怎么設(shè)計(jì)引物克隆？？？？求各位大神指教！�。� |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 蟲友問答-分子生物 |
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waterworld
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8樓2013-06-18 14:40:03
2樓2013-06-16 22:36:52
hongyz
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-17 13:58:09
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| 這篇文獻(xiàn)應(yīng)該可以解決你的問題： 長(zhǎng)距離反向PCR技術(shù)高效擴(kuò)增已知DNA片斷的側(cè)翼序列 |
3樓2013-06-17 00:16:26
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-17 13:58:15
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5’-RACE，基因組文庫(kù)篩選出完整基因，反向PCR，染色體步移等。具體文獻(xiàn)和Procotols，查分子克隆。 Molecular cloning--Laboratory manuals(2001)3rd edition（3 Volumes) Free http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5998393 |
4樓2013-06-17 01:27:49
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