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笨笨小張新蟲 (初入文壇)
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[求助]
木聚糖酶純化分離
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有做木聚糖酶的嗎，我的酶硫酸銨沉淀后有活性，但是用透析袋透析后活性大幅降低，無法往后做分離純化活性跟蹤，請(qǐng)各位大俠出招相助，萬分感謝······· [ Last edited by 笨笨小張 on 2013-6-22 at 18:44 ] |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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gaojuan1985
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2樓2013-06-23 15:51:18
笨笨小張
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3樓2013-06-24 19:23:50
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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最簡(jiǎn)單的方法：用木聚糖酶的專一性配體作為配體制備成親和層析柱，進(jìn)行親和層析。 1.木聚糖酶的專一性配體可以是其底物，木聚糖酶肯定能夠與其底物結(jié)合并且發(fā)生反應(yīng)，有兩個(gè)改進(jìn)辦法：（1）替換掉底物的個(gè)別側(cè)鏈基團(tuán)，或者在側(cè)鏈基團(tuán)上共價(jià)結(jié)合小的基團(tuán)，阻止催化反應(yīng)，但是能夠?qū)Ｒ恍越Y(jié)合酶；（2）降低溫度，不要到冰點(diǎn)，比如4度，減慢催化反應(yīng)。因此，可以用木聚糖酶的底物或者底物的修飾化合物作為配體制備成親和層析柱，進(jìn)行親和層析。 2.木聚糖酶的專一性配體也可以是其底物的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑不一定就是與底物直接競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，但是反正競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑在有沒有底物存在時(shí)都能與木聚糖酶專一性結(jié)合，這就夠了！因此，可以用木聚糖酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑作為配體制備成親和層析柱，進(jìn)行親和層析。 |
4樓2013-06-25 00:35:53
凌波麗
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5樓2013-06-25 00:37:38
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