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beibei1225鐵蟲 (初入文壇)
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請問如何對軟瓊脂克隆形成實驗進行細胞計數(shù)和染色？
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請問如何對軟瓊脂克隆形成實驗進行細胞計數(shù)和染色？需要染料染細胞嗎還是直接在鏡下計數(shù)？ [ Last edited by youlinglyw on 2014-3-15 at 19:33 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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細胞計數(shù)方法 實驗原???： 當待測細胞懸液中細胞???勻分布時， 通過測定一定體積懸液中的細胞 的數(shù)目，?????????算出??毫???細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。 具體??作： 1. 將計數(shù)??????蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)???。 2. 將細胞懸液???出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)???之間，??? 置 3min ，注??蓋片下????有氣泡，也??能讓懸液??入??邊槽中。 3. 計算???四大格細胞總數(shù)，壓線細胞???計左側(cè)和上方的。然???按公??計算： 細胞數(shù) /mL= 四大格細胞總數(shù)/4×10 4 說明：公??中除以 4 ，因為計數(shù)了 4 個大格的細胞數(shù)。 公??中乘以 10 4 因為計數(shù)???中??一個大格的體積為： 1.0mm （長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高） =0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3 （注??： 鏡下?????有兩個以上細胞組??的細胞團， 應(yīng)按???個細胞計算， 若細胞團 10% 以上，說明分散??好，需??新制備細胞懸液） 細胞計數(shù)方法： ①蓋好蓋玻片：???一套血???計數(shù)???，將特制的蓋玻片蓋在血???計數(shù)槽上。 ②制備計數(shù)用的細胞懸液： 用???管??? 5 滴細胞懸液到離心管中， 加入 5 滴錐蟲?? 染液（ 0.4 ％）或苯胺黑，活細胞??會被染色，加入染液???就???以在顯微鏡下區(qū) 別活細胞和死細胞。 ③將細胞懸液滴入計數(shù)???： 將待測細胞懸液??????勻， 然?????????少??懸液沿蓋片邊 緣緩緩滴入， ??????蓋片下充滿懸液， 注??蓋片下????有氣泡， 也??能讓懸液?? 入??邊槽中。 ④統(tǒng)計 4 個大格的細胞數(shù)： 將血???計數(shù)???放于顯微鏡的低??鏡下觀察， 并移動計 數(shù)???，當看到鏡中出現(xiàn)計數(shù)方格???，數(shù)出四角的 4 個大鉻（??個大格???有 16 個 中格）中沒有被染液染上色的細胞數(shù)目。 ⑤計算原細胞懸液的細胞數(shù) : 按照下???公??計算細胞密度： （細胞懸液的細胞數(shù)） /mL ??（ 4 個大格??細胞數(shù)/4)×2×10 4 說明：公??中除以 4 因為計數(shù)了 4 個大格的細胞數(shù)。 公??中乘以 2 因為細胞懸液于染液是 1 ： 1 稀釋。 公??中乘以 104 因為計數(shù)???中??一個大格的體積為： 1.0mm （長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）?? 0.1mm 3 而 1mL ?? 1000mm 3 細胞計數(shù)??點： ①進行細胞計數(shù)時，??求懸液中細胞數(shù)目??低于 1×107 L -1 ，如果細胞數(shù)目很 少??進行離心??懸浮于少??培養(yǎng)液中。 ②??求細胞懸液中的細胞分散良好，???則影??計數(shù)準確性。 ③???樣計數(shù)??， 應(yīng)充分混勻細胞懸液， 尤其時多次???樣計數(shù)時更??注????次???樣 都??混勻，以求計數(shù)準確。 ④數(shù)細胞的原則是???數(shù)完整的細胞，若細胞???集??團時，???按照 1 個細胞計算。 如果細胞壓在格線上時，則???計上線，??計下線，???計???線，??計左線。 ⑤??作時， 注??蓋片下??能有氣泡， 也??能讓懸液??入??邊槽中， ???則????新計 數(shù)。 ??學(xué)者易犯的錯誤： 計數(shù)??未將待測懸液???打???勻。滴入細胞懸液時蓋玻片下 出現(xiàn)氣泡。滴入懸液時的??太多，至使細胞懸液??入??邊的槽中。 |
2樓2013-07-20 19:23:05
七文yaya
新蟲 (初入文壇)
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3樓2014-03-15 17:30:12
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