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beibei1225鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
請問如何對軟瓊脂克隆形成實(shí)驗進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和染色？
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請問如何對軟瓊脂克隆形成實(shí)驗進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和染色？需要染料染細(xì)胞嗎還是直接在鏡下計數(shù)？ [ Last edited by youlinglyw on 2014-3-15 at 19:33 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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細(xì)胞計數(shù)方法 實(shí)驗原???： 當(dāng)待測細(xì)胞懸液中細(xì)胞???勻分布時， 通過測定一定體積懸液中的細(xì)胞 的數(shù)目，?????????算出??毫???細(xì)胞懸液中細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)目。 具體??作： 1. 將計數(shù)??????蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)???。 2. 將細(xì)胞懸液???出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)???之間，??? 置 3min ，注??蓋片下????有氣泡，也??能讓懸液??入??邊槽中。 3. 計算???四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞???計左側(cè)和上方的。然???按公??計算： 細(xì)胞數(shù) /mL= 四大格細(xì)胞總數(shù)/4×10 4 說明：公??中除以 4 ，因為計數(shù)了 4 個大格的細(xì)胞數(shù)。 公??中乘以 10 4 因為計數(shù)???中??一個大格的體積為： 1.0mm （長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高） =0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3 （注??： 鏡下?????有兩個以上細(xì)胞組??的細(xì)胞團(tuán)， 應(yīng)按???個細(xì)胞計算， 若細(xì)胞團(tuán) 10% 以上，說明分散??好，需??新制備細(xì)胞懸液） 細(xì)胞計數(shù)方法： ①蓋好蓋玻片：???一套血???計數(shù)???，將特制的蓋玻片蓋在血???計數(shù)槽上。 ②制備計數(shù)用的細(xì)胞懸液： 用???管??? 5 滴細(xì)胞懸液到離心管中， 加入 5 滴錐蟲?? 染液（ 0.4 ％）或苯胺黑，活細(xì)胞??會被染色，加入染液???就???以在顯微鏡下區(qū) 別活細(xì)胞和死細(xì)胞。 ③將細(xì)胞懸液滴入計數(shù)???： 將待測細(xì)胞懸液??????勻， 然?????????少??懸液沿蓋片邊 緣緩緩滴入， ??????蓋片下充滿懸液， 注??蓋片下????有氣泡， 也??能讓懸液?? 入??邊槽中。 ④統(tǒng)計 4 個大格的細(xì)胞數(shù)： 將血???計數(shù)???放于顯微鏡的低??鏡下觀察， 并移動計 數(shù)???，當(dāng)看到鏡中出現(xiàn)計數(shù)方格???，數(shù)出四角的 4 個大鉻（??個大格???有 16 個 中格）中沒有被染液染上色的細(xì)胞數(shù)目。 ⑤計算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù) : 按照下???公??計算細(xì)胞密度： （細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)） /mL ??（ 4 個大格??細(xì)胞數(shù)/4)×2×10 4 說明：公??中除以 4 因為計數(shù)了 4 個大格的細(xì)胞數(shù)。 公??中乘以 2 因為細(xì)胞懸液于染液是 1 ： 1 稀釋。 公??中乘以 104 因為計數(shù)???中??一個大格的體積為： 1.0mm （長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）?? 0.1mm 3 而 1mL ?? 1000mm 3 細(xì)胞計數(shù)??點(diǎn)： ①進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)時，??求懸液中細(xì)胞數(shù)目??低于 1×107 L -1 ，如果細(xì)胞數(shù)目很 少??進(jìn)行離心??懸浮于少??培養(yǎng)液中。 ②??求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，???則影??計數(shù)準(zhǔn)確性。 ③???樣計數(shù)??， 應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液， 尤其時多次???樣計數(shù)時更??注????次???樣 都??混勻，以求計數(shù)準(zhǔn)確。 ④數(shù)細(xì)胞的原則是???數(shù)完整的細(xì)胞，若細(xì)胞???集??團(tuán)時，???按照 1 個細(xì)胞計算。 如果細(xì)胞壓在格線上時，則???計上線，??計下線，???計???線，??計左線。 ⑤??作時， 注??蓋片下??能有氣泡， 也??能讓懸液??入??邊槽中， ???則????新計 數(shù)。 ??學(xué)者易犯的錯誤： 計數(shù)??未將待測懸液???打???勻。滴入細(xì)胞懸液時蓋玻片下 出現(xiàn)氣泡。滴入懸液時的??太多，至使細(xì)胞懸液??入??邊的槽中。 |
2樓2013-07-20 19:23:05
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