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[求助]
請(qǐng)教關(guān)于Sephacryl 丙烯酰胺葡聚糖凝膠的問(wèn)題~~
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最近要分離純化蛋白質(zhì)，我所要的組分大致分子量在200KDa左右，想用Sephacryl 嘗試一下，實(shí)驗(yàn)室冰箱里有以前用過(guò)的Sephacryl S200和Sephacryl S300，但是沒(méi)有說(shuō)明書(shū)不知道選用哪個(gè)合適，在網(wǎng)上搜了一圈也沒(méi)找到詳細(xì)的關(guān)于Sephacryl的資料，有幾個(gè)問(wèn)題請(qǐng)教： 1、不同型號(hào)Sephacryl的分辨范圍 2、對(duì)于以前使用過(guò)的Sephacryl再利用如何處理？ 3、處理及裝柱過(guò)程與葡聚糖凝膠柱有什么區(qū)別嗎？ 4、使用長(zhǎng)100cm內(nèi)徑1.0cm的柱子可以嗎？ |
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137167741: 金幣+2, 小木蟲(chóng)交流，共同進(jìn)步~~ 2013-06-24 21:16:20
稚涵曉曉: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-24 23:02:30
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1).Sephacryl S100分離范圍是1kD~100kD之間；Sephacryl S200分離范圍是5kD~250kD之間;Sephacryl S300分離范圍是10kD~1500kD之間。 2）.先用0.5M NaOH沖洗柱子1CV，再用20%的乙醇沖洗柱子1CV至1.5CV.將洗好的柱子放置在4度環(huán)境下等待下次再用！也可以將它倒出來(lái)用真空泵將其抽干，留于下次再用！ （All commonly used buffers, 0.2 M NaOH, 0.1 M HCl, 1 M acetic acid, 8 M urea, 6 M guanidine HCl, 1 % SDS, 20 % ethanol, 30 % propanol丙醇, 30 % (acetonitrile tested at 40°C for 1 week), 0.5 M NaOH (only for cleaning-in-place） 3）.裝柱與葡聚糖凝膠柱沒(méi)有什么區(qū)別，都是要將其裝到分離效果達(dá)到最好！ 4）.使用多長(zhǎng)的柱子看你的需要了，你的上樣體積是多大的。你就選多長(zhǎng)的！長(zhǎng)的柱子分離效果會(huì)好點(diǎn)！一般上樣量是柱體積的0.5%~5%！ |
2樓2013-06-24 12:35:27
3樓2013-06-24 13:09:05
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6樓2013-07-04 12:05:00
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