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[求助]
請教關于Sephacryl 丙烯酰胺葡聚糖凝膠的問題~~
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最近要分離純化蛋白質，我所要的組分大致分子量在200KDa左右，想用Sephacryl 嘗試一下，實驗室冰箱里有以前用過的Sephacryl S200和Sephacryl S300，但是沒有說明書不知道選用哪個合適，在網(wǎng)上搜了一圈也沒找到詳細的關于Sephacryl的資料，有幾個問題請教： 1、不同型號Sephacryl的分辨范圍 2、對于以前使用過的Sephacryl再利用如何處理？ 3、處理及裝柱過程與葡聚糖凝膠柱有什么區(qū)別嗎？ 4、使用長100cm內徑1.0cm的柱子可以嗎？ |
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4樓2013-06-24 19:38:55
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
137167741: 金幣+2, 小木蟲交流，共同進步~~ 2013-06-24 21:16:20
稚涵曉曉: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2013-06-24 23:02:30
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1).Sephacryl S100分離范圍是1kD~100kD之間；Sephacryl S200分離范圍是5kD~250kD之間;Sephacryl S300分離范圍是10kD~1500kD之間。 2）.先用0.5M NaOH沖洗柱子1CV，再用20%的乙醇沖洗柱子1CV至1.5CV.將洗好的柱子放置在4度環(huán)境下等待下次再用！也可以將它倒出來用真空泵將其抽干，留于下次再用！ （All commonly used buffers, 0.2 M NaOH, 0.1 M HCl, 1 M acetic acid, 8 M urea, 6 M guanidine HCl, 1 % SDS, 20 % ethanol, 30 % propanol丙醇, 30 % (acetonitrile tested at 40°C for 1 week), 0.5 M NaOH (only for cleaning-in-place） 3）.裝柱與葡聚糖凝膠柱沒有什么區(qū)別，都是要將其裝到分離效果達到最好！ 4）.使用多長的柱子看你的需要了，你的上樣體積是多大的。你就選多長的！長的柱子分離效果會好點！一般上樣量是柱體積的0.5%~5%！ |
2樓2013-06-24 12:35:27
3樓2013-06-24 13:09:05
5樓2013-06-24 23:03:45
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