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陽(yáng)光西騎士木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
急！ 考馬斯亮藍(lán)法標(biāo)準(zhǔn)曲線建立求助！
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小弟這兩天想用考馬斯亮藍(lán)法G250測(cè)定材料與某種蛋白的結(jié)合量，先做標(biāo)曲，照網(wǎng)上的方法取 10 mg考馬斯亮藍(lán)用5 ml 95%乙醇超聲溶解，加10 ml 85% 磷酸，再用水定容到 100 ml。 接著取1mg/ml的BSA用不同量用PB緩沖液稀釋到1 ml。從第一個(gè)開(kāi)始加入 5 ml考馬斯亮藍(lán)溶液�；靹�，等待3 min后測(cè)定 。接著類似方法測(cè)定第二個(gè)等。結(jié)果很崩潰，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性很差，從BSA 60ug起后面的數(shù)據(jù)幾乎停留不動(dòng)，而且后來(lái)重新測(cè)定BSA 20ug的數(shù)據(jù)又比第一次測(cè)定的小，這是什么原因呢？ 可見(jiàn)波長(zhǎng) 595 nm，所有的玻璃儀器都洗滌干凈并用乙醇沖洗烘干，蛋白用的是PB溶液溶解稀釋�？捡R斯亮藍(lán)現(xiàn)配現(xiàn)用，里面無(wú)可見(jiàn)不溶物。 測(cè)了四次了 都是這樣的數(shù)據(jù) |
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