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lyf2003新蟲 (初入文壇)
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[求助]
帶氨基的磁納米粒子表面用戊二醛改性后,如何表征醛基的含量? 已有2人參與
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本人將改性后的氨基磁珠與戊二醛反應(yīng),使磁珠表面帶有醛基,從而可與蛋白質(zhì)鍵合,但是在優(yōu)化戊二醛用量及反應(yīng)pH值時(shí),表征出現(xiàn)困難,想給位大俠求助 實(shí)驗(yàn)步驟: 1)磁珠上的氨基與戊二醛的醛基反應(yīng)時(shí),在吡啶的水溶液(10mM, pH6.0鹽酸調(diào)節(jié)pH值)中反應(yīng),戊二醛濃度5%,室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3h 2)反應(yīng)完畢后,用水清洗5次,使未反應(yīng)戊二醛基本清洗干凈 3)將鹽酸羥胺溶液(pH=5.0,NaOH調(diào)節(jié)以除去鹽酸羥胺中游離的HCL)(其用量相對(duì)于磁珠的醛基是過量的)50ml與清洗后的醛基磁珠在40度下攪拌反應(yīng)4h 4)用pH計(jì)測(cè)量反應(yīng)后的pH值,理論上,由于醛基與鹽酸羥胺反應(yīng),生成肟,并釋放出與醛基等量的HCL,用NaOH滴定至pH=5.0時(shí),根據(jù)消耗NaOH的體積計(jì)算醛基的摩爾數(shù) 問題: 1)整個(gè)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)完后,pH值基本無變化 自己分析原因:a.可能鹽酸羥胺來表征醛基含量不合適,正準(zhǔn)備直接用適量的戊二醛與鹽酸羥胺溶液反應(yīng),觀察反應(yīng)后pH值的變化,并用氫氧化鈉滴定,計(jì)算出醛基含量與配制的醛基含量作對(duì)比,看誤差有多大;b. 與氨基通過希夫堿形式連接的戊二醛由于碳氮雙鍵不穩(wěn)定,在水清洗過程中或在與鹽酸羥胺溶液(pH=5.0)反應(yīng)時(shí) ,水解掉了,本人對(duì)有機(jī)合成只知甚少,不知道脂肪醛的希夫堿是不是在水清洗時(shí)就能洗掉呢?文獻(xiàn)中將到希夫堿容易在酸性條件下水解,是不是在鹽酸羥胺溶液(pH=5.0)中水解了呢?可是就算水解了,生成的戊二醛也應(yīng)該能與鹽酸羥胺反應(yīng)啊,反應(yīng)后的pH值怎么會(huì)不變呢? 2)接著將反應(yīng)溶液放置過夜,第二天來測(cè)pH值,pH值從5.0下降至4.7左右,必思不得其解,這是什么原因呢? 3)此試驗(yàn)重復(fù)了2遍,每次2個(gè)樣品同時(shí)反應(yīng),均出現(xiàn)此情況,是不是因?yàn)椴牧现泻邢7驂A結(jié)構(gòu)(不穩(wěn)定)使得采用羥胺法進(jìn)行醛基的含量測(cè)定變得不可行呢? 求有經(jīng)驗(yàn)的大俠指點(diǎn),不勝感激,拜謝! |

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