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wuqiyang168木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
酶解多糖以及寡糖分析
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本人要做多糖酶解實(shí)驗(yàn)，對(duì)于酶解條件控制，寡糖分析都比較模糊，敢問(wèn)各位前輩傳授下經(jīng)驗(yàn)，拜謝！ |
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2樓2013-06-28 15:14:08
3樓2013-06-29 13:26:15
liweixiaoye
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wuqiyang168: 金幣+10, ★★★很有幫助, thanks 2013-07-01 08:22:16
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wuqiyang168: 金幣+10, ★★★很有幫助, thanks 2013-07-01 08:22:16
| 多糖用酶解的方法，效率一般不高，水解率在30%左右，最好結(jié)合幾種外切糖苷酶來(lái)水解，最主要的幾個(gè)酶解條件是溫度、PH、底物（多糖）濃度、酶濃度和酶解時(shí)間，一般條件優(yōu)化也是圍繞這幾個(gè)條件展開(kāi)，另外多糖水解最主要是要控制水解度的問(wèn)題，也就是水解地位低聚糖的聚合度，一般聚合度在15個(gè)蛋湯一下活性較高，但基本的空間構(gòu)型丟失，可采取一定活性保持技術(shù)對(duì)其保護(hù)，檢測(cè)時(shí)用HPLC接示差折光檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器可對(duì)糖分子進(jìn)行檢測(cè)，一般用正向色譜柱（氨基柱，如SUGAR-D或日本東曹達(dá)TOSHO的柱子都可以有很好的分離）但檢出限最低的是離子色譜，可用戴安的離子色譜，條件須掌握好。希望對(duì)你有幫助 |
4樓2013-06-30 16:19:12
wuqiyang168
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5樓2013-07-01 08:30:29
liweixiaoye
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【答案】應(yīng)助回帖
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酶的選擇要根據(jù)你的糖苷鍵類型和單糖組成來(lái)確定，比如你的多糖中有Gal、Glc、Fru、Ara四種蛋湯是以BETA1-4糖苷鍵相連的，想要得到其中含Gal、Fru、Ara三種單糖的低聚糖，那就應(yīng)該選擇內(nèi)切的BETA1-4半乳糖苷酶來(lái)水解，同理想要得到其他的，也可以這種方法操作； 簡(jiǎn)單的水解度可以用透析的方法確定，通過(guò)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量測(cè)定透析結(jié)束后，透析袋中多糖的量，因?yàn)榈途厶呛蛦翁且呀?jīng)被透析出去了，或者利用HPLC-GPC的方法可以非常準(zhǔn)確的定量； 如果不用酶解得得方法可以選擇酸水解的方式，可以用TFA，約80攝氏度水解，控制反應(yīng)時(shí)間，必要時(shí)降低溫度，可以有比較好的效果，缺點(diǎn)是有的時(shí)候付男性的果糖會(huì)被分解掉，因此這種方法不適合水解果聚糖。 |
6樓2013-07-01 20:59:59
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