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goodsophia新蟲 (初入文壇)
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[交流]
HIT-T15細(xì)胞培養(yǎng) 已有2人參與
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有養(yǎng)HIT-T15細(xì)胞的童鞋嗎，額，養(yǎng)了半年了，細(xì)胞總是有黑點(diǎn)，離心無(wú)法解決。懷疑是支原體污染，加了去支原體藥處理了近一個(gè)月了，還是不行。黑點(diǎn)很多，看著很臟的樣子，細(xì)胞長(zhǎng)得也很慢。有童鞋養(yǎng)這個(gè)細(xì)胞嗎，你們的怎么樣呢，額，急求交流啊 ~~~ |
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137167741: 金幣+1, 小木蟲交流，共同進(jìn)步~~ 2013-07-02 16:08:26
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137167741: 金幣+1, 小木蟲交流，共同進(jìn)步~~ 2013-07-02 16:08:26
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你確定你細(xì)胞名字寫對(duì)了？還有你確定你見過(guò)這個(gè)細(xì)胞很干凈的樣子？ 我碰到過(guò)很多細(xì)胞怎么養(yǎng)都不干凈。有的細(xì)胞株會(huì)分泌蛋白質(zhì)的。顯微鏡下仔細(xì)看，小點(diǎn)還會(huì)原地蠕動(dòng)，這個(gè)就很正常了，這基本上可以確定是蛋白質(zhì)顆粒。也有可能是死細(xì)胞比較多。 你這細(xì)胞我懷疑你名字搞錯(cuò)了，我在國(guó)家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞共享平臺(tái)上就沒找到。你先確定下這個(gè)細(xì)胞是不是可以分泌某種蛋白。不是所有細(xì)胞都可以長(zhǎng)得漂漂亮亮的！��！ |
2樓2013-07-01 16:47:56
renshaofang
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3樓2013-07-02 11:00:45
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137167741: 金幣+2, 小木蟲交流，共同進(jìn)步~~ 2013-07-02 16:08:39
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HIT-T15（倉(cāng)鼠beta胰島細(xì)胞）細(xì)菌破壁方法細(xì)菌破壁是成功提取DNA的關(guān)鍵步驟之一。革蘭氏陽(yáng)性菌的肽聚糖層構(gòu)成堅(jiān)韌的三維立體結(jié)構(gòu),而陰性菌肽聚糖層構(gòu)成疏松的二維結(jié)構(gòu),因此不同種類細(xì)菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸鈉（SDS）裂解法、溶菌酶法、反復(fù)凍融法、研磨法、超聲波法等。不同細(xì)菌對(duì)溶解劑有不同的抗性,溶解細(xì)菌前需先取少量菌懸液,加一定濃度的溶解劑,看是否能溶解菌體。 HIT-T15（倉(cāng)鼠beta胰島細(xì)胞）若SDS和溶菌酶均能溶解菌體 ,最好使用既廉價(jià)又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶應(yīng)加入SDS促進(jìn)溶菌;如果60℃溶菌過(guò)程緩慢,可將溫度提高到70～75℃;有些菌也可用脫氧膽酸鹽破裂細(xì)胞膜溶解菌體。對(duì)溶解劑有抗性的菌類,可在含青霉素或甘氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使其不形成細(xì)胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同時(shí)用反復(fù)凍融、超聲波或氧化鋁和玻璃粉研磨輔助破壁。 細(xì)胞污染解決方法: 污染表現(xiàn)是很碎小的黑色聚堆的東西（能想象一堆碎松針堆個(gè)圓嗎），高倍鏡下似乎能動(dòng)（或者只是物理運(yùn)動(dòng)），動(dòng)作幅度不大，發(fā)展較慢，出現(xiàn)后對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和狀態(tài)看不出影響，但一旦吹散則發(fā)展迅速，污染明顯，細(xì)胞死亡，培養(yǎng)基發(fā)黃. 這是結(jié)團(tuán)的細(xì)菌。開始長(zhǎng)得很慢，一旦擴(kuò)散就很快使培養(yǎng)基變渾濁。出現(xiàn)染菌只能丟掉，重新開始培養(yǎng)。不必試圖把菌殺死保留細(xì)胞，因?yàn)檫@一般無(wú)法辦到。 高倍鏡下看“團(tuán)”的周圍，其實(shí)可以看打到很多細(xì)菌在不停地“打彎”運(yùn)動(dòng)。如果發(fā)現(xiàn)得早， 可以盡可能地將其稀釋除掉控制的辦法就是多開紫外，實(shí)驗(yàn)前東西現(xiàn)用現(xiàn)滅，從瓶子里取培養(yǎng)基時(shí)多用移液管少用槍頭，勤快打掃無(wú)菌室。 |
4樓2013-07-02 11:02:04
goodsophia
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5樓2013-07-02 13:25:35
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6樓2013-07-02 17:06:57
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7樓2013-07-03 09:16:55
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