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后悔無期金蟲 (小有名氣)
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[求助]
RACE 技術(shù)
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1、模板確定5`和3`后,5RACE的引物設(shè)計是與模板序列反向互補, 3RACE與模板序列相同? 2、TA克隆,平板或者菌液PCR的假陽性很高,可能存在啥原因呢? |

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第一個問題 3‘RACE是為了得到未知cDNA的下游部分,所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”,目的是于互補序列結(jié)合,在已知序列上尋找合適的片段就可以了。 而5’RACE引物雖然也是“已知序列的一部分”,但是由于延伸方向必須是5“--3”,所以其延伸方向和已知序列相反,目的是于自身已知序列結(jié)合,也就是說,可以在已知序列上尋找合適的片段做引物,但是寫出來的是其“反向互補的序列”。 附件是我以前搜集的資料,講得比較詳細(xì),你可以下下來看看 |

金蟲 (小有名氣)

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